COQ6突变导致FSGS患者足细胞损伤

发布时间：2020-04-06 02:19

【摘要】：背景:局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerular sclerosis,FSGS)是一种常见的肾病,常与蛋白尿和渐进性肾功能衰竭有关,其特征为足细胞损伤,肾小球毛细血管袢的缺失和塌陷。然而,FSGS的发病机制尚未完全阐明,近年来分子遗传学的进展提供了越来越多的证据表明足细胞的结构和功能紊乱成为FSGS发病机制的关键。在本研究中,通过对一例FSGS患者行基因测序,找出致病基因并验证其致病机制。方法:采用新一代测序技术(next-generation sequencing,NGS)筛出与FSGS致病相关基因,之后进行Sanger测序验证,最后筛出致病基因。后提取先证者全血行RNA-PCR验证,检测致病基因mRNA表达水平,并通过免疫组织化学验证其表达水平。体外实验中,利用siRNA敲除足细胞中的候选致病基因进行功能验证。通过流式细胞及凋亡蛋白caspase3的免疫印记检测验证细胞凋亡情况,查阅文献可知细胞凋亡与线粒体功能障碍有关,之后通过mitosox检测线粒体ROS生成及检测线粒体结构蛋白F-actin的表达及排列验证线粒体功能紊乱。结果:通过NGS和Sanger测序验证筛选出可能的致病基因-COQ6。该基因(NM_182480)的第一外显子exonl存在无义突变.;c.G41A:p.W14X,第41位密码子的UGG变为UGA(色氨酸变为终止密码子)。先证者全血RNA的PCR检测及免疫组化结果均显示COQ6表达明显下降。体外实验中,RNAi抑制COQ6表达后,通过Annexin V/FITC结合流式细胞仪检测到凋亡细胞数明显增多,同时凋亡相关蛋白活性Capase-3的表达明显增加。此时线粒体产生的ROS显著增加(MitoSOX信号增强),结构蛋白F-actin排列紊乱。结论:COQ6的突变将影响线粒体的呼吸链功能,从而产生过多的ROS,导致足细胞骨架紊乱而诱导足细胞凋亡,这可能是该患者出现FSGS的可能机制。为今后的FSGS的筛查提供基本的理论依据。
【图文】：

１：先证者肾脏病理图，病理示ＦＳＧＳ。Ａ：光镜下肾组织ＰＡＳ染色（２００Ｘ）邋；邋Ｂ：织ＰＡＭ染色（２００Ｘ）邋；邋Ｃ：电镜下示足细胞足突融合及消失。逡逑先证者及其父亲既往无蛋白尿或血尿的病史。其母亲曾于我院行肾活检：。此，证母的晨外周脉血

病变患者（对照组）的肾组织中进行了⑶Ｑ６、ＣＵＢＮ和ＡＰ０Ｌ１的免疫组织化学染色实逡逑验。免疫组化结果显示，先证者及其母亲的⑶Ｑ６和⑶ＢＮ表达水平均显著低于对照组逡逑（图２）。然而，先证者ＡＰ０Ｌ１表达明显高于对照组（图２），，这与文献［８］报道相矛盾，逡逑所以，ＡＰ０Ｌ１的致病可能被排除。由于⑶ＢＮ主要表达在肾小管［９］，而ＦＳＧＳ主要是逡逑肾小球病变，其特征是足细胞足突的缺失，因此ＣＵＢＮ的致病可能亦被排除，从而确逡逑认Ｃ０Ｑ６突变的致病作用。逡逑ＣＯＱ６逡逑４／；；：邋■＊邋＾．１－逡逑Ｖ逦．邋ｒ．逦；：？逦■逡逑＃求’域Ｕ．．逡逑ｃ＿逡逑ＣＯＮ逦Ｐ逦Ｍ逡逑图２：邋Ｃ０Ｑ６，邋ＣＵＢＮ及ＡＰ０Ｌ１在肾脏组织的免疫组化结果。（Ｘ４００）逡逑ＣＯＮ：对照组，病理为微小病变；Ｐ：先证者，病理为ＦＳＧＳ；邋Ｍ：先证者母亲，病理为ＦＳＧＳ。逡逑３．逦Ｃ０Ｑ６－ｍＲＮＡ在先证者全血中表达下降逡逑２０逡逑
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R692.6

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本文编号：2615863