MT-12对膀胱癌细胞增殖及转移影响的初步研究

发布时间：2020-04-07 13:45

【摘要】：[目的]本研究通过体外实验探索中华眼镜蛇膜毒素MT-12对膀胱癌细胞系(RT4、T24)增殖、凋亡、迁移、黏附能力的影响。[方法]1.利用CCK8法检测不同浓度的MT-12(0,0.25和0.5 μg/mL)处理膀胱癌RT4、T24细胞1,2,3,4,5d后,对膀胱癌RT4、T24细胞增殖能力的影响,对照组加入等量不含MT-12的PSA。2.利用流式细胞术检测MT-12(0,0.5 μg/mL)处理膀胱癌RT4、T24细胞(6,24h)后,对膀胱癌RT4、T24细胞凋亡的影响,主要是通过凋亡细胞率,观察在凋亡方面的改变。3.采用细胞划痕实验检测MT-12对膀胱癌RT4、T24细胞迁移能力的影响,0,0.25和0.5 μg/mL的MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞24h后,通过细胞的划痕距离的变化检测细胞的迁移能力。4.黏附实验通过不同浓度MT-12(0,0.25和0.5μg/mL)处理膀胱癌RT4、T24细胞24h后,检测OD值来判断MT-12对膀胱癌RT4、T24细胞的黏附能力的影响。[结果]1.CCK8检测结果显示,不同浓度MT-12(0,0.25和0.5μg/mL)处理膀胱癌RT4、T24细胞1,2,3,4,5d后,发现MT-12可以显著抑制膀胱癌RT4、T24细胞增殖能力。2.流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示,两种浓度的MT-12(0,0.5 μ g/mL)膀胱癌RT4、T24细胞6、24小时后,实验组可以显著增加凋亡细胞的比例细胞。3.细胞划痕实验结果显示,不同浓度MT-12(0,0.25和0.5μg/mL)处理膀胱癌RT4、T24细胞24h后,实验组可以显著抑制细胞的迁移能力。4.黏附实验结果显示,不同浓度MT-12(0,0.25和0.5μg/mL)处理膀胱癌RT4、T24细胞24h后,实验组可以明显抑制膀胱癌细胞的黏附能力。[结论]中华眼镜蛇毒膜毒素以浓度一时间依赖的方式抑制膀胱癌RT4、T24细胞系的增殖能力,并诱导其调亡,同时抑制了膀胱癌RT4、T24细胞系的迁移、黏附能力。
【图文】：

１、２、３、４、５天，ＣＣＫ８染色法检测ＭＴ－１２处理后膀胱癌细胞的增殖情况。逡逑１．１逦ＲＴ４细胞逡逑表１－１及图１－１结果显示，在起始时间，各组的０Ｄ值都是０．２０±０．００，邋２４ｈ逡逑后对照组的０Ｄ值为０．２７±０．０６；邋ＭＴ－１２处理组（０．１、０．２５和０．５ｕｇ／ｍＬ）的逡逑０Ｄ值分别为０．２６±０．０１，０．２３±０．０３及０．２２±０．０２，实验组与对照组无统计学逡逑差异。４８ｈ后，对照组的０Ｄ值为０．５１±０．０１；邋ＭＴ－１２处理组（０．１、０．２５和０．５逡逑Ｕｇ／ｍＬ）的邋０Ｄ邋值分另ｌｊ为邋０．４３±０．０３、０．邋３０±０．０１邋及邋０．邋３１±０．０２，其中邋０．５ｙ逡逑ｇ／ｍＬ邋ＭＴ－１２处理组与对照组有统计学意义（ｐ＜０．０５）。７２ｈ后，对照组的ＯＤ值逡逑为邋０．邋７２±０．邋０３；邋ＭＴ－１２邋处理组（０．１、０．邋２５邋和邋０？邋５邋ｙ邋ｇ／ｍＬ）的邋０Ｄ邋值分别为邋０．邋６７逡逑±０．０１，邋０．４６±０．０４邋及邋０．４０±０．０２，，０．２５、０．５ｕｇ／ｍＬＭＴ－１２邋处理组与对照组逡逑有统计学意义（ｐ〈0．邋０５）。ＭＴ－１２邋作用邋９６ｈ邋及邋１２０ｈ邋后，除了邋９６ｈ，邋０．１邋ｗ邋ｇ／ｍＬ邋ＭＴ－１２逡逑处理组与对照组有统计学差异（ｐ＜0．邋０５），其余各ＭＴ－１２处理组的０Ｄ值与对照逡逑组相比

采用Ａｎｎｅｘｉｎ邋Ｖ－ＦＩＴＣ／ＰＩ凋亡试剂盒来了解ＭＴ－１２对ＩＴＴ４、Ｔ２４逡逑膀胱癌细胞的生长抑制作用是否与细胞凋亡相关。逡逑如图２－１所示，用０．邋５邋ｕ邋ｇ／ｍＬ邋ＭＴ－１２处理ＲＴ４、Ｔ２４细胞６ｈ后，即可明显观逡逑察出灯４、Ｔ２４细胞凋亡的显著增加。逡逑在表２中，在６ｈ、２４ｈ时收样，两组膀胱癌细胞的空白对照与溶媒对照相比逡逑较，凋亡率无明显统计学差异，证明溶媒液体对实验未有干扰。６ｈ时Ｔ２４、ＲＴ４逡逑细胞凋亡率分别为（９．２２±０．３１）邋％、（２０．６３±１．５４）邋％；邋２４ｈ时凋亡率大幅度逡逑增加为（３０．２７±３．５）邋％、（２７．９３±２．４１）邋％，实验组与对照组差异显著，ｐ制逡逑均小于０．邋０Ｕ如图２－２凋亡二维散点图所示，ＭＴ－１２能够诱导Ｔ２４细胞的早期凋逡逑亡和晚期凋亡，而ＲＴ４则是主要发生早期凋亡。细胞的凋亡率随着时间的延长而逡逑升高。因此，该结果与增殖实验的结果趋势一致，ＭＴ－１２作用于Ｔ２４、ＲＴ４细胞逡逑后
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.14

【参考文献】

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本文编号：2617982