ZnT7对高糖诱导的NRK-52E细胞EMT的保护作用

发布时间：2020-04-17 16:10

【摘要】：目的:探讨锌转运体-7(ZnT7)在高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化(EMT)中的作用,并分析其机制。实验方法:双重荧光染色探测正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)中ZnT7的亚细胞定位。在正常大鼠肾小管上皮细胞中高糖(HG,30 mM)诱导转分化(EMT)。hZnT7-EGFP和siRNA分别转染、干扰NRK-52E细胞制造ZnT7过表达和沉默模型。Western blot检测ZnT7和EMT指标的表达,以及MAPK/ERK和TGF-β/Smad信号通路。结果:1、HG诱导NRK-52E细胞中Zn~(2+)水平下降。30 Mm HG刺激NRK-52E细胞12 h,24 h,48 h和72 h,TSQ荧光染色显示HG刺激24h后,与对照组相比细胞内Zn~(2+)水平明显下降。2、HG诱导NRK-52E细胞中ZnT7表达水平上调以及干扰、转染效率的检测。Western blot显示与对照组相比,HG刺激48h后NRK-52E细胞中ZnT7的表达水平上调,转染、干扰48h后效率最高,把48h作为后期实验干扰、转染的时间点。3、ZnT7在NRK-52E细胞中的亚细胞定位。荧光图显示ZnT7在NRK-52E细胞核周区域的高尔基体上有表达。4、NRK-52E细胞中Zn~(2+)水平。荧光图显示在HG组,ZnT7低表达组,ZnT7低表达/HG组Zn~(2+)着色斑点分布在NRK-52E细胞核周区域。ZnT7过表达组Zn~(2+)着色最强,ZnT7低表达/HG组Zn~(2+)着色最弱。5、ZnT7对HG诱导的NRK-52E细胞的EMT有保护作用。Western blot结果显示与对照组相比ZnT7过表达显著减弱了HG诱导的EMT,如α-SMA和vimentin表达上调,E-cadherin表达下调。6、ZnT7对TGF-β/Smad信号通路的影响。Western blot结果显示与对照组相比,HG组p-Smad2/3表达显著上调,ZnT7过表达显著抑制了HG诱导的p-Smad2/3水平;HG组,HG/ZnT7过表达组增强了p-Smad2/3的表达和HG诱导的NRK-52E细胞的EMT。但是TGF-βI受体的抑制剂10μM SB43152共处理细胞后,有效的抑制了Smad2/3的磷酸化和HG诱导的EMT。7、ZnT7对MAPK信号通路的而影响。Western blot结果显示与对照相比,HG处理组phospho-p38 MAPK和phospho-ERK的表达显著上调,相反,ZnT7过表达显著抑制phospho-ERK的表达。但是ERK的抑制剂PD98059共处理后,降低了HG诱导的EMT。结论:1、ZnT7在NRK-52E的高尔基体上有表达。2、ZnT7对HG诱导的NRK-52E细胞的EMT有保护作用。3、ZnT7通过调节TGF-β/Smad和MAPK/ERK信号通路抑制HG诱导的NRK-52E细胞的EMT。
【图文】：

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图 2 ：a 和 b， NRK-52E 细胞 30 mM HG 处理 12 h，24 h， 48 h 和 72 h，，Western blot检测 ZnT7 的表达 (n=10)；图 c-f， Western blot 检测转染效率(n=3)。所有的实验至少重复三次。(* P < 0.05 与对照组相比； ** P < 0.001 与对照组相比)3.3 ZnT7 在 NRK-52E 细胞中的亚细胞定位有文献报道 ZnT7 在多种细胞的高尔基体上有表达，为了检测 NRK-52E 细胞中 ZnT7 的亚细胞定位，双标记 ZnT7 和 TGN38 (高尔基体 Marker 蛋白)。荧光结果显示 ZnT7 在 NRK-52E 细胞的高尔基体上有表达(图 3a-d)。

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图 2 ：a 和 b， NRK-52E 细胞 30 mM HG 处理 12 h，24 h， 48 h 和 72 h，Western blot检测 ZnT7 的表达 (n=10)；图 c-f， Western blot 检测转染效率(n=3)。所有的实验至少重复三次。(* P < 0.05 与对照组相比； ** P < 0.001 与对照组相比)3.3 ZnT7 在 NRK-52E 细胞中的亚细胞定位有文献报道 ZnT7 在多种细胞的高尔基体上有表达，为了检测 NRK-52E 细胞中 ZnT7 的亚细胞定位，双标记 ZnT7 和 TGN38 (高尔基体 Marker 蛋白)。荧光结果显示 ZnT7 在 NRK-52E 细胞的高尔基体上有表达(图 3a-d)。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.2;R692.9

【参考文献】