NPRL2影响去势抵抗性前列腺癌对奥拉帕尼敏感性的研究

发布时间：2020-04-23 13:06

【摘要】：目的:探究NPRL2在改善去势抵抗型前列腺癌(CRPC)对奥拉帕尼敏感性的影响方法:Western Blot法检测正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)、前列腺癌细胞系(LNCaP)、前列腺癌细胞系(PC3)和耐恩杂鲁胺的去势抵抗型前列腺癌细胞(LNPER)中NPRL2的蛋白表达情况。通过慢病毒转染到CRPC细胞建立NPRL2的过表达和干扰,实时荧光PCR和Western blot法验证其NPRL2过表达和干扰效率。在体外实验中为了解NPRL2在CRPC细胞中调控Olaparib的敏感性,通过CCK-8法检测细胞增殖和细胞毒性、流式细胞术检测细胞凋亡和Transwell侵袭和迁移小室实验检测细胞侵袭转移。此外,我们研究了过表达和沉默NPRL2影响凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3蛋白、BAX蛋白和Bcl-2蛋白)、共济失调毛细血管扩张突变基因(ataxia telangiectasia-mutated,ATM)蛋白和上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin蛋白和vimentin蛋白)的表达。此外,我们进行了体内实验,以验证NPRL2在调节Olaparib敏感性中相关蛋白发生改变的结果。结果:NPRL2调控去势抵抗型前列腺癌(CRPC)对Olaparib的敏感性;Western blot显示NPRL2在RWPE-1细胞中低表达而在LNCaP、PC3和LNPER细胞中高表达并成功构建过表达和干扰NPRL2的稳定细胞株,QPCR及Western blot结果显示慢病毒转染能明显增高和降低NPRL2的mRNA和蛋白水平。CCK8实验表明NPRL2过表达促进的CRPC细胞生长和对Olaparib抗性,沉默NPRL2抑制CRPC细胞增殖,增强对Olaparib的敏感性。流式细胞和Transwell实验分别显示,沉默NPRL2联合Olaparib能明显促进细胞凋亡和阻止细胞侵袭转移。Western blot结果表明沉默NPRL2联合Olaparib处理后cleaved caspase-3、BAX蛋白、E-cadherin蛋白表达水平增高和Bcl-2蛋白、vimentin蛋白表达水平降低。沉默NPRL2能下调CRPC细胞的p-ATM和ATM蛋白表达水平,反之则上调p-ATM和ATM蛋白表达水平。体内实验结果证明Olaparib能显著抑制沉默NPRL2后的PC3细胞的裸鼠皮下肿瘤生长,Western blot检测显示沉默NPRL2后,皮下肿瘤凋亡增加,DNA损伤增加。结论:沉默NPRL2能增强CRPC对Olaparib的敏感性,并且NPRL2可以作为潜在的治疗靶标并预测CRPC对Olaparib的抗性。
【图文】：

蛋白表达

图 1. NPRL2 在 CRPC 细胞中表达与 ATM 蛋白表达的关系Fig 1. Expression of NPRL2 in CRPC cells and its relationship with ATM protein expressionHigher levels of NPRL2 expression in prostate cancer cells. NPRL2 promotes theproliferation of PCa cells and enhances the levels of phospho-ATM and ATM.A, The relativelevels of NPRL2 expression in RWPE-1, LNPER, PC3, and LNCaP cells were determined by

细胞凋亡,敏感性

图 2. CRPC 细胞中 NPRL2 的表达与 Olaparib 敏感性的关系和对细胞凋亡的影响Fig 2. Relationship between expression of NPRL2 and Olaparib sensitivity in CRPC cells andits effect on apoptosisNPRL2 enhances resistance to Olaparib, and NPRL2 silencing enhances Olaparib sensitivityby promoting CRPC cell apoptosis. A, L: LNPER, P: PC3.L-EV, L-sh, P-EV and P-sh were
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.25

【参考文献】