维甲酸信号通路在前列腺铥激光切除术后创面修复中的作用和机制探讨

发布时间：2020-04-30 08:00

【摘要】：目的:研究前列腺增生是一种常见病多发病,病情重者需要手术治疗。经尿道前列腺铥激光切除术较传统的前列腺电切手术,出血少、恢复快、无经尿道前列腺电切综合征等风险。但是术后仍存在尿频尿急尿痛,甚至膀胱颈口狭窄等并发症。在这其中关键在于前列腺术后创面修复。维甲酸信号通路在创面修复领域研究较为广泛,其在皮肤、急性肾衰竭、神经修复中均有明显的作用。因而本课题设计研究维甲酸信号通路在前列腺创面中的作用及其机制。方法:本研究通过既往建立的比格犬经尿道铥激光前列腺手术模型中,分别切除未手术、术后1周、2周、3周的犬前列腺。首先免疫组化染色维甲酸信号通路三个受体(RARα、RARβ、RARγ),观察术后犬前列腺受体的数量变化以及他们的细胞定位。根据数量变化及细胞定位推测它们可能作用的细胞,通过PCR、westernbolt等分子生物学手段量化并且对靶向细胞的功能研究。进一步通过特异受体的拮抗剂及分子生物学手段探讨其机制。结果:本研究发现维甲酸三个受体(RARα、RARβ、RARγ)均表达于比格犬前列腺中,并且在铥激光前列腺切除术后的创面中均较术前明显升高。但是变化趋势不相同。RARα、RARγ术后持续增加,但是RARβ在术后一周增加较为明显,术后2、3周逐渐下降。并且三个受体细胞定位不同,RARα主要表达于腔上皮细胞;RARγ表达于腔上皮的基底层及少量间质细胞;而RARβ主要定位于间质细胞,进一步免疫荧光双染色确定为间质中的巨噬细胞。体外实验发现巨噬细胞可通过分泌作用于其他细胞如成纤维细胞等。ATRA能够促进巨噬细胞的向M2型巨噬细胞极化,促进抗炎修复相关细胞因子如TGF-β等的释放。并且进一步将ATRA作用的巨噬细胞培养基作用于间质细胞,能够明显加强其迁移、收缩、活化的特性。并且促进了血管内皮细胞的形成血管。进一步的分子生物学研究进一步证实在巨噬细胞中介导此过程的主要是受体是RARβ。结论:通过研究我们发现维甲酸信号通路参与了犬前列腺创面的修复过程,并且不同的受体作用于不通的细胞,其中RARβ作用于巨噬细胞。维甲酸通过促进巨噬细胞向M2型细胞转化,作用于间质细胞促进创面的愈合。而RARβ是其中的关键受体。
【图文】：

免疫组化,受体,上皮,创面修复

25图 1.RARα、β、γ免疫组化示各受体在比格犬正常前列腺及术后 1 周、2 周、3 周的表达情况。RARα主要分布于正常犬前列腺的上皮部分；RARβ主要分布于前列腺的间质细胞内；RARγ在前列腺腺上皮和间质均有分布，以腔上皮为主。RARα、γ在创面修复的过程中表达持续升高，第二周及第三周较第一周持续表达增加，而 RARβ在第一周最高，第二周逐渐下降，第三周继续下降。Figure 1. H&E staining of RARs on normal canine prostate and the wound area after TmLRP.

双染色,绿色,红色

29图 4.RARβ（红色）与 Vimentin（绿色）双染色。Fig. 4 Double immunofluorescence of vimentin and RARβ in the prostatic wound. vimentinwas used as a stroma marker (green, vimentin; red, RARβ).
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R699.8

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