Ces5a基因在大鼠睾丸中的表达研究

发布时间：2020-04-30 17:56

【摘要】：目的研究分析Ces5a基因在大鼠睾丸发育过程中的表达情况,探究该基因在精子发生过程中可能起的作用,为男性不育相关疾病的研究提供一定的理论基础,为今后对该基因的研究提供相应的数据支持。方法(1)取出生后2-65日龄,共21个时间点的雄性Wistar大鼠,每个时间点分别取四只不同窝别的大鼠,睾丸组织提取总mRNA和总蛋白;(2)将总mRNA反转录成cDNA,采用Real-time PCR方法检测不同时间点大鼠睾丸组织中Ces5a基因mRNA的转录水平。(3)用Western blot方法检测不同时间点大鼠睾丸组织中Ces5a蛋白表达水平。(4)用免疫组织化学方法分别观察12日龄、20日龄、40日龄、60日龄的大鼠睾丸组织中Ces5a蛋白表达定位情况。结果(1)Real-time PCR检测Ces5a基因mRNA转录情况,结果可以看出该基因mRNA在大鼠出生后的第2至第65天均有表达。在大鼠出生后第2-12天Ces5a基因mRNA的表达量较低;与2-12天相比,14-16天mRNA的表达量下降至最低水平(P0.05);与14-16天相比,20-35天该基因mRNA的表达量有显著升高(P0.05);与20-35天相比,40-65天该基因mRNA的表达量有显著升高,达到高峰(P0.05)。(2)Western blot方法检测Ces5a蛋白表达水平,结果可知,在大鼠出生后第2至第65天Ces5a蛋白均有表达。在大鼠出生后第2-12天Ces5a蛋白的表达量较低;与2-12天相比,14-16天Ces5a蛋白的表达量无显著变化(P0.05);与14-16天相比,20-35天该蛋白的表达量有显著升高(P0.05);与20-35天相比,40-65天该蛋白的表达量无显著变化(P0.05)。(3)通过免疫组织化学方法观察Ces5a蛋白表达的定位,该蛋白在12日龄,20日龄,40日龄,60日龄的睾丸组织中均有表达,阳性表达呈棕黄色。其中精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞处被染为棕黄色,呈阳性,说明Ces5a蛋白在该处有表达。结论(1)Ces5a基因可能参与了大鼠精原细胞增殖过程及减数分裂过程。(2)Ces5a基因在圆形精子细胞处有少量表达,长形精子细胞处没有表达,提示我们该基因可能在圆形精子发生和精子变形过程中发挥了特殊的作用。
【图文】：

图1. SYCP3基因在大鼠出生后第2,4,6,8,10,12,15,20,25,30天的转录水平Figure 1. Transcriptional levels of the SYCP3 gene at 2, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 20, 25, 30 daysafter birth in rats.（Liu TD, Yu BY, Luo FH, et al,2012）

Ces5a和GAPDH的溶解曲线和扩增曲线
【学位授予单位】：内蒙古医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R698.2

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本文编号：2646033