【摘要】：目的:探索Nec-1是否能够通过抑制Necroptosis途径的激活,从而减轻糖尿病肾病大鼠肾组织炎症介质的释放和损伤。方法:将成年雄性SD大鼠分为糖尿病肾病组(DN组)、正常对照组(NC)和NC+Nec-1组(NN组),DN组大鼠造模成功后再分为DN组、DN+Vehicle(DV组)、DN+Nec-1(Nec-1组)。每组在4、8、12、16周共设置4个观察点,每个时间点6只大鼠,DN组造模采用链脲菌素(STZ)按50mg/kg一次性腹腔注射。DN+Nec-1(Nec-1组)、NC+Nec-1(NN组)从造模成功后第一天开始予以Nec-1按单次剂量3.5mg/kg灌胃,隔天一次。DN+DMSO(DV组)从造模成功后第一天开始予以Nec-1的溶解剂-二甲基亚砜(DMSO)按10%DMSO-PBS液灌胃,隔天一次。处死大鼠前采集血、尿标本,检测血清尿素、血糖、血清肌酐和24小时尿蛋白;肾脏石蜡切片做普通病理;采用免疫组化、免疫印迹(WB)和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肾组织中受体相互作用蛋白1(RIP1)、受体相互作用蛋白3(RIP3)和白介素-6(IL-6)的蛋白表达和m RNA相对表达量,并分析Nec-1对糖尿病肾病大鼠以上指标的影响。结果:1.血、尿生化检测:1)血糖和24小时尿蛋白:(1)DN、DV组在不同时间点血糖和尿蛋白均明显高于NC、NN组(P0.01,Nec-1组不同时间点血糖和尿蛋白均明显低于DN、DV组(P0.01)。(2)血糖、尿蛋白在不同时间点NC与NN组比较以及DN与DV组比较均无显著性差异(P0.05)。(3)DN、DV组血糖和尿蛋白随时间逐渐升高(P0.05)。2)血清肌酐和尿素:(1)DN、DV组不同时间点血清肌酐和尿素均明显高于NC、NN组(P0.01),Nec-1组不同时间点血清肌酐和尿素均明显低于DN、DV组(P0.01)。(2)血清肌酐、尿素在不同时间点NC与NN组比较以及DN与DV组比较均无显著性差异(P0.05)。(3)DN、DV组血清肌酐和尿素随时间变化无显著性差异(P0.05)。2.肾脏病理:DN、DV组可见不同程度的肾小球增大、系膜基质增多、细胞数增多、部分肾小管扩张、颗粒和空泡变性。而Nec-1组大鼠的上述肾脏病理改变较DN、DV组不同程度的减轻。NC、NN组肾小球、小管形态基本正常。3.免疫组化:(1)不同时间点DN、DV组大鼠肾脏组织中RIP1、RIP3、IL-6表达量均明显高于NC、NN组(P0.01),Nec-1组不同时间点RIP1、RIP3、IL-6表达量均较DN、DV组明显减少(P0.01)。(2)RIP1、RIP3、IL-6表达量在不同时间点NC与NN组比较以及DN与DV组比较均无显著性差异(P0.05)。4.Western-blot:(1)不同时间点DN、DV组大鼠肾脏组织中RIP1、RIP3、IL-6蛋白表达量均较NC、NN组明显增加(P0.01),Nec-1组不同时间点RIP1、RIP3、IL-6蛋白表达量均较DN、DV组减少(P0.05)。(2)RIP1、RIP3、IL-6蛋白表达量在不同时间点NC与NN组比较以及DN与DV组比较均无显著性差异(P0.05)。5.Real-Time PCR:(1)不同时间点DN、DV组大鼠肾脏组织中RIP1、RIP3、IL-6m RNA相对表达量均较NC、NN明显增加(P0.01),Nec-1组不同时间点RIP1、RIP3、IL-6m RNA相对表达量均较DN、DV组明显减少(P0.01)。(2)RIP1、RIP3、IL-6m RNA表达量在不同时间点NC与NN组比较以及DN与DV组比较均无显著性差异(P0.05)。结论:坏死性凋亡途径的激活可能参与了糖尿病肾病大鼠肾组织的炎症介质的释放和损伤。使用Nec-1干预后,糖尿病肾病大鼠肾组织中RIP1、RIP3和IL-6表达均下降,Nec-1可能通过抑制坏死性凋亡途径而减轻糖尿病肾病肾组织炎症介质的释放和损伤。
【图文】：
五组不同时间点大鼠肾脏HE染色(×400)
25图 6 五组不同时间点大鼠肾脏 PAS 染色(×400)2.4 免疫组化2.4.1 RIP1 免疫组化1）从第 4 周开始，DN、DV 组不同时间点 RIP1 表达量均明显高于 NC、NN 组（P＜0.01）。2）使用 Nec-1 干预后，Nec-1 组不同时间点 RIP1 表达量均较 DN、DV 组明显减少（P＜0.01）。3）RIP1 表达量在不同时间点 NC 与 NN 组以及 DN 与 DV 组比较均无显著性差异（P＞0.05）。 (见表 13，图 7、8)
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.2;R692.9
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本文编号：2656356
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