探究雌激素对肾缺血再灌注损伤后肾间质纤维化的影响

发布时间：2020-05-14 15:28

【摘要】：目的:研究雌激素是否通过调控TGF-β_1表达来改善肾缺血-再灌注损伤后肾间质纤维化的程度,从而进一步探讨雌激素对肾缺血-再灌注损伤发挥保护作用的可能机制。方法:(1)将提前两周给予去除卵巢预处理的32只雌性SD大鼠,随机均分为四组(8只/组),分别为:不给予干预的正常组(Control组),只暴露肾脏不给予肾缺血的假手术组(Sham组),完成整个造模的肾缺血-再灌注损伤组(I/R组)及造模完成前给予雌激素皮下注射的雌激素干预组(E_2+I/R组)。Control组:不给予处理,常规饲养。Sham组:常规麻醉后,将右侧肾脏完整切除,完全暴露左侧肾脏,但不给予无创血管夹夹闭左侧肾蒂,等待45分钟并给予盐水湿润纱布覆盖后暴露出来的左侧肾脏,倒计时结束后将左侧肾脏还纳,给予切口丝线逐层缝合并用碘伏在次擦拭切口。I/R组:等待大鼠完全进入麻醉状态后后,先摘下右侧肾脏,分离左肾肾蒂周围脂肪组织,使用无损伤血管夹延横向完全夹闭左侧肾蒂,在45分钟后松开血管夹,等待肾脏颜色恢复,证明血流再灌注成功,逐层缝合后关闭腹腔并给予碘伏擦拭切口。E_2+I/R组:在造模开始的三天前,在大鼠大腿内侧经皮下注射给予雌激素(100微升/公斤)。连续注射3天,每天固定时间给予一次,剩余步骤参考上一组造模方法。各组大鼠完成上述操作后再常规饲养14天后,常规处死后将右侧肾脏完整取出,为避免损伤肾组织,摘除过程中钝性分离并使用玻璃分针。(2)苏木素-伊红(HE)染色观察肾小管损伤并性数据分析。(3)Masson染色组织经过固定液处理后,给予乙醇脱水,石蜡包埋后切片,石蜡切片给予马松染色处理,最后光镜下观察每组肾纤维化改变情况。(3)Western-blot检测每组肾间质中TGF-β_1蛋白上调或者下降与否。结果:(1)HE显示I/R组显现明显病理损伤,出现肾小球萎缩,肾小管出现肿胀、坏死及细胞脱落,管腔大小明显改变、肾间质出现了病理变化,Paller评分与Control组和Sham组相比较明显升高(P0.05);反而再观察E_2+I/R组时可以看到肾小球结构无明显改变,肾小管上皮细胞、肾间质、炎性细胞浸润较I/R组轻,Paller评分较I/R组低(P0.05)。(2)通过Masson染色实验表明I/R组间质纤维化明显;E_2+I/R组纤维化较前者明显缓解。(3)雌激素可降低肾缺血-再灌注损伤后肾间质中TGF-β_1蛋白的表达,肾I/R组肾脏中TGF-β_1的表达较Control组有明显上调(P0.05)。E_2+I/R组肾脏中TGF-β_1蛋白的表达水平较I/R组有明显下调(P0.05)。结论:雌激素可能通过下调大鼠模型肾间质中TGF-β_1的表达,改善肾小管间质纤维化的程度,从而发挥对肾缺血-再灌注损伤后的保护作用。
【图文】：

实 验 结 果(Results)1. 肾组织 HE 染色及 Paller 评分分析Control 组因为未予特殊处理，遂组织病理表现与正常组织相同，无明显病理变化。Sham 组大鼠虽然通过操作将其左侧肾脏完全暴露于腹腔外，但是此过程中未伤及肾蒂及肾脏本身，对其功能及形态未造成巨大影响，遂可以看出其整体结构和肾小管都未见明显异常，小管上皮细胞排列整齐同正常组织无异，更无水肿及炎性细胞浸润的迹象。缺血-再灌注组肾小球结构明显变化，出现萎缩，，肾小管出现肿胀、坏死及细胞脱落，管腔大小明显改变、肾间质广泛出现病理变化，Paller 评分较 Control组和假手术组明显升高（P＜0.05）；E2+I/R 组：肾小球结构无明显改变，肾小管上皮细胞、肾间质、炎性细胞浸润较缺血-再灌注组轻，Paller 评分较缺血-再灌注组组低（P＜0.05，图 1A,BA-c 黑色箭头为较典型的肾小管病理变化）

Masson 染色Masson 染色后，光学显微镜下可以观察到细胞外胶原纤维染色后呈现蓝色，而胞核染色后分别呈红色和黑蓝色。观察可见 Control 组、Sham 组大鼠肾小管上匀排布，肾小囊、小管基底膜、肾小球系膜与血管周围蓝染区均较少；I/R 组质出现大量胶原堆积。E2+I/R 组虽然有少量蓝色胶原堆积，但较 I/R 组少(图
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R692

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本文编号：2663563