RhD血型对肾移植影响的初步研究

发布时间：2020-05-22 21:48

【摘要】：目前,被国际输血协会(ISBT)确认的29个红细胞血型系统中最具多态性和复杂性的血型系统即是Rh血型系统。传统上,认为Rh血型系统在临床中的重要性仅次于ABO血型系统。RhD是Rh血型系统中最为重要的血型表型,根据红细胞表面是否含有D抗原将Rh血型分为Rh阳性和Rh阴性。RhD血型是肾移植术前的必备检测项目。D抗原在大多数个体中是表达的,有一部分个体的红细胞与抗D血清反应较弱,提示D抗原在红细胞表面表达异常,这其中包括弱D(weak D)、部分D(partial D)、放散D(Del)表现型等,而这些D抗原变异型的血清学初筛结果部分为阴性,这种RhD假阴性的存在对肾移植供受者产生了潜在的威胁。2012年1月1日起,欧美日均已实行对所有RhD血清学阴性的供受者进行RHD基因检测,而目前在我国肾移植中RhD血型的确定基本为血清学检测。RhD假阴性变异型是影响中国肾移植长期生存未被重视的一个领域。为此,本研究对经血清学检测为RhD阴性的潜在肾移植受者103例血液样本行定量PCR检测RHD10个外显子,分析D抗原变异型(弱D、部分D、放散D表现型)对临床肾移植供受选择的影响,同时分析RhD血型对肾移植术后的相关影响。目的:探讨我国肾移植中RhD阴性血型对肾移植供受者选择及肾移植术后的影响。方法:收集2006年1月-2016年1月我科等候肾移植的患者中经血清学检测为RhD-Neg的血样103例,采用分子生物学方法(定量PCR-测序技术)进行RHD基因分型。结果:103例血样中,RhD真阴性(即10个外显子全部缺失)56例(占54.5%),RhD假阴性(即RhD阳性,但是10个外显子中有部分缺失、重复、错义突变)47例(占45.6%)。在47例RhD假阴性中,放散D(Del)33 例(占70.2%)、部分 D(partialD)占 13例(占27.7%),弱D(weak D)1例(占2.1%)。血清学与分子生物学对RhD阴性识别的差异呈统计学显著性(P0.001)。结论:血清学检测出的RhD阴性中有45.6%实际为RhD阳性变异体,说明血清学技术对识别RhD阴性呈较高错误率。由此,在临床肾移植中,会导致RhD变异体的受者丧失肾脏移植替代治疗的机会;RhD变异体的供者移植给RhD真阴性的受者后可能发生不明原因的排斥反应、移植肾功能恢复延迟(DGF)、移植物存活时间缩短等不良愈后。本研究证明,利用分子生物学技术进行受者和供者RhD血型基因分型,对于精确肾移植的进步具有重要的临床意义。
【图文】：

原理图,测序技术,半导体,原理

１．原理：定量ＰＣＲ方法逡逑本方法采用多重ＰＣＲ技术，扩增所选择的的ＲＨＤ基因外显子突变区域，逡逑结合新一代半导体测序平台ＢＥＳ邋４０００进行检测。如图２所示，该半导体测序技逡逑术使用了一种布满小孔的高密度半导体芯片，一个小孔就是一个测序反应池。逡逑在每个反应池中，ＤＮＡ聚合酶以单链ＤＮＡ为模板，按碱基互补原理，合成互逡逑补的ＤＮＡ链，当ＤＮＡ聚合酶把核苷酸聚合到延伸中的ＤＮＡ链上时，会释放逡逑出１个氢离子，反应池中的ＰＨ发生改变，位于池下的离子感受器感受到Ｈ＋离逡逑子信号，Ｈ＋离子信号再直接转化为数字信号，从而读出ＤＮＡ序列。新一代半逡逑导体测序芯片的每个微孔里仅能容纳一个微球，微球表面含有大约１００万个逡逑ＤＮＡ分子拷贝。测序时１个个核苷酸分子连续流过芯片微孔，如果核苷酸与特逡逑定微孔中的ＤＮＡ分子互补

阴性,主菜单,仪器,硕士学位论文

逦硕士学位论文逦逡逑１１）邋程序运行结束后７２小时内，返回主菜单，进行水洗。如超过７２小逡逑时，则对仪器进行氯洗再进行水洗。水洗完毕，，在主菜单上关仪器，在放ｄＮＴＰ逡逑孔上套上管子防尘。如长时间不使用，关闭氮气瓶气阀。逡逑结果：逡逑Ｄ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R699.2

【参考文献】