铜绿假单胞菌制剂对小鼠膀胱癌和脾细胞作用的机制研究

发布时间：2020-05-26 16:42

【摘要】：目的：探索出一种构建小鼠膀胱肿瘤原位模型的优化方法。研究铜绿假单胞菌制剂(PA-MSHA)体内抗膀胱癌效应和对脾脏细胞增殖效果的影响,探索其作用的机制,为膀胱癌的辅助治疗提供理论支持和依据。 方法：通过硝酸银、盐酸、胰酶和乙醇预处理C57BL/6小鼠膀胱粘膜,术后1和24小时随机处死每组3只小鼠,摘取小鼠膀胱组织,应用HE染色后观察膀胱粘膜的病理变化；戊二醛固定,膀胱粘膜细胞在电镜下观察微观结构的变化；应用甲苯胺蓝染色后,显微成像系统下观察膀胱粘膜固有层的肥大细胞数目变化；应用过碘酸-希夫(PAS)染色,观察处理后的膀胱粘膜中GAG层的变化。应用硝酸银、盐酸、胰酶和乙醇预处理小鼠膀胱后,构建膀胱癌的原位肿瘤模型,然后计算各组的成瘤率。建立C57BL/6小鼠肿瘤皮下模型,7天后随机分为PA-MSHA高、中、低浓度组和对照组,同时监测肿瘤体积的变化；分别在建模后14、21和28天处死每组3只小鼠,收集血清,应用流式细胞仪检测CD4+和CD8+；完整摘取肿瘤组织,固定后计数VEGF评分和微血管密度(MVD)。外科无菌条件下摘取C57BL/6小鼠的脾脏,制备脾细胞悬液,给予不同剂量PA-MSHA后孵育72小时,同时设立对照组,在孵育结束后测定0D值,计算增值效率。 结果：应用胰酶和酒精作用1小时后,膀胱粘膜局部上皮伞状细胞脱落,粘膜下层暴露；在酸碱和硝酸银处理的膀胱中,粘膜大部完整性被破坏,同时粘膜下层暴露较多,粘膜的连续性中断；在对炎症细胞计数后发现,对照组和实验组间炎症细胞浸润均不表现出统计学差异。24小时后,胰酶和乙醇处理组可见粘膜局部轻度水肿并充血,粘膜的完整性恢复较好,细胞间可见紧密连接；酸碱和硝酸银处理组膀胱上皮粘膜薄厚不均一,仍可见脱落的部分粘膜。PA-MSHA作用组肿瘤的体积与对照组比较明显缩小,效果呈现浓度梯度变化；同时,高浓度PA-MSHA作用组小鼠生存时间最长,对照组小鼠生存时间最短；对肿瘤组织固定切片后发现VEGF和MVD在PA-MSHA作用组显著降低；术后14天,所有指标均有所上升；随着时间的进展,在术后21天和28天,PA-MSHA作用组小鼠血清CD4+、CD8+水平显著提高；在脾细胞增值实验中,我们发现PA-MSHA作用组OD值较对照组显著增高,且呈现时间和剂量依赖性。 结论：硝酸银和酸碱可作为构建鼠膀胱肿瘤原位模型的首选预处理因素。同时,PA-MSHA能够促进脾细胞的增值,提高血清CD4+、CD8+水平,减少肿瘤组织中VEGF和MVD的数量,抑制肿瘤的生长,提高小鼠的生存率和免疫力,发挥抗肿瘤作用。PA-MSHA为膀胱癌的治疗提供了新的策略。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.14

【参考文献】

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本文编号：2682125