TET2调控MAP4K1的表达对T24细胞迁移及凋亡的影响

发布时间：2020-06-01 10:38

【摘要】：目的:探讨TET2在膀胱尿路上皮细胞癌T24细胞中对MAP4K1的影响及对T24细胞的迁移及凋亡的影响,为膀胱癌的诊治提供实验依据。材料与方法:(1)材料:选择膀胱尿路上皮癌T24细胞株为研究对象。(2)方法:通过向T24细胞转染TET2过表达和抑制表达载体及相应的阴性对照载体,利用Western Blot印迹检测TET2及MAP4K1蛋白的表达量;利用细胞划痕实验检测T24细胞迁移能力的改变;利用流式细胞学实验检测T24细胞凋亡的改变。实验分为过表达组(T24细胞+过表达TET2质粒组)及阴性对照组(T24细胞+空载质粒组)、抑制组(T24细胞+si-TET2组)及阴性对照组(T24细胞+si-TET2-NC组)、空白对照组(T24细胞组)。利用Lipofectamine~(TM)2000分别向过表达组及其阴性对照组、抑制组及其阴性对照组T24细胞内转染体外合成的TET2过表达质粒、空载质粒、si-TET2片段、TET2-NC片段。培养6小时后,通过荧光镜下视野与光镜下视野对比,细胞的转染效率达到80%以上便可进行后续的实验。利用WesternBlot印迹检测TET2及MAP4K1的蛋白表达量、细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力、流式细胞学实验检测各组细胞凋亡率。(2)统计方法:用SPSS23.0统计软件及EXCEL软件处理分析所得数据,计量资料以均数±标准差(?±s)表示,两组之间计量均数的比较采用t检验(student’s t test),当p0.05时,说明有统计学意义。结果:1.细胞转染:TET2质粒和TET2-siRNA成功转染进T24细胞中;2.WB实验:TET2过表达组与TET2过表达对照组相比,在TET2过表达组中TET2蛋白表达含量明显增高,而MAP4K1蛋白表达含量明显下降;TET2抑制组与TET2抑制组对照组相比,TET2抑制组中TET2表达含量明显下降,而MAP4K1的蛋白表达含量明显升高;空白组分别与TET2过表达对照组、TET2抑制对照组相比,其差异无统计学意义;3.细胞划痕实验:TET2过表达组与TET2过表达对照组相比,TET2过表达组的愈合率降低;TET2抑制组与TET2抑制组对照组相比,TET2抑制组的愈合率明显增高;空白组分别与TET2过表达对照组、TET2抑制对照组相比,其差异无统计学意义;4.细胞凋亡实验:TET2过表达组与TET2过表达对照组相比,TET2过表达组的凋亡率降低;TET2抑制组与TET2抑制组对照组相比,TET2抑制组的凋亡率明显增高;空白组分别与TET2过表达对照组、TET2抑制对照组相比,其差异无统计学意义。结论:TET2下调MAP4K1的表达抑制T24细胞的迁移能力。
【图文】：

可进行后续的实验。图 3.1 转染细胞情况（100×）3.2 TET2 水平改变在蛋白层面对 MAP4K1 的影响将检测合格的且已经转染好的细胞培养 24h 后，按照蛋白提取方法提取蛋白，用内参调整每组蛋白量，使之每组蛋白量大致相同；调整好每组蛋白样液量后，，用 Western Blot 法检测目的蛋白含量，每个蛋白重复 Western Blot 3-4，如图 3.2.1：A：TET2 过表达组；B：TET2 过表达对照组；C：TET2 抑制组 3092；D：TET2 抑制组 1417；E：TET2 抑制组 519；F：TET2 抑制对照组；G：空白组。

图 3.1 转染细胞情况（100×）2 TET2 水平改变在蛋白层面对 MAP4K1 的影响将检测合格的且已经转染好的细胞培养 24h 后，按照蛋白提取方法提，用内参调整每组蛋白量，使之每组蛋白量大致相同；调整好每组蛋白样，用 Western Blot 法检测目的蛋白含量，每个蛋白重复 Western Blot 图 3.2.1：A：TET2 过表达组；B：TET2 过表达对照组；C：TET2 抑制组 TET2 抑制组 1417；E：TET2 抑制组 519；F：TET2 抑制对照组；G：空白
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.14

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本文编号：2691360