miR-7-5p对前列腺癌细胞糖代谢影响及相关功能研究

发布时间：2020-06-01 17:29

【摘要】：目的:研究mi R-7-5p对前列腺癌细胞系中在能量代谢途径以及生物学功能中相关作用,初步探寻其在前列腺癌中相关作用机制。方法:LNCa P、DU145、PC3细胞株体外转染mi R-7-5p慢病毒、mimics,CCK-8实验及克隆形成实验检测细胞增殖克隆能力。另外,通过葡萄糖及乳酸试剂盒检测转染完48-72小时mi R-7-5p慢病毒的细胞上清,检测葡萄糖及乳酸变化水平,通过ELISA试剂盒检测葡萄糖代谢途径中相关酶G6PD、NADPH、CITRATE的含量的变化,通过数据库比对发现,mi R-7-5p与MEG3结合且mi R-7-5p与MEG3表达有一定相关性,另外在LNCa P、DU145、PC3细胞株体外转染mi R-7-5p INHIBITOR,CCK-8实验及克隆形成实验检测细胞增殖能力变化.实时定量PCR检测转染完慢病毒的前列腺癌细胞中mi R-7-5p的表达,送基因测序,进一步在PC3细胞中过表达带有Biotin标记的mi R-7-5p,通过RNA PULL DOWN实验后送测序,结合生物学信息网站预测,选择交集靶基因,回复证明下游通路中基因蛋白水平改变,明确下游信号通路,进一步明确糖代谢作用机制及相关信号通路。结果:CCK-8法实验表明过表达mi R-7-5p慢病毒及mimics后明显抑制前列腺癌细胞LNCa P、DU145、PC3细胞的增殖能力;体外克隆实验表明,过表达mi R-7-5p后抑制前列腺癌细胞LNCa P、DU145、PC3的克隆形成能力。前列腺癌细胞中过表达mi R-7-5p慢病毒后明显抑制前列腺癌细胞的葡萄糖摄取,葡萄糖的消耗量明显降低,同时乳酸产量较对照组明显减少,且通过ELISA试剂盒检测糖代谢途径中G6PD、NADPH、CITRATE等代谢酶含量较对照组有明显下降,通过RNA pull down和转录组及TARGETSCAN等基因网站预测发现PIK3CD、IL6R为下游靶基因,进一步寻找糖代谢相关信号通路,并了解mi R-7-5p在前列腺癌中相关抑癌作用。结论:mi R-7-5p发挥抑癌基因的作用,mi R-7-5p能够明显抑制前列腺癌细胞的葡萄糖摄取,mi R-7-5p可以结合MEG3,抑制前列腺癌细胞的增殖及克隆,明确了其在前列腺癌中具有抑癌作用。
【图文】：

癌组织,前列腺癌,正常组织,患者预后

图 1、MEG3 的含量在不同的组织中含量明显不同，癌组织要比正常组织低，，而转移性癌组织含量要比癌组织低，且随着前列腺癌 Gleason 评分增加 MEG3 表达也是下降2. MEG3 表达量的不同对患者生存率的影响也不相同图 2、高表达 MEG3 的患者的生存率要比低表达的患者预后好很多。

患者预后,生存率,癌组织,患者

腺癌组织、转移性前列腺癌中含量明显不同。图 1、MEG3 的含量在不同的组织中含量明显不同，癌组织要比正常组织低，而转移性癌组织含量要比癌组织低，且随着前列腺癌 Gleason 评分增加 MEG3 表达也是下降2. MEG3 表达量的不同对患者生存率的影响也不相同
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.25

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