通过定量蛋白质组学技术预测潜在的抗肾癌药物新靶点

发布时间：2020-06-12 20:48

【摘要】：目的:肾癌的发病率和死亡率逐年升高,传统手术术后复发率也很高,因此本实验的实验目的是为了预测肾癌的抗肿瘤药物新靶点,寻找高效的抗肾癌药物。方法:从手术切除中获得5对肾癌组织和癌旁的肾组织,并使用QExactive Plus与nanoLC系统以无标记定量蛋白质组学方法进行分析,筛选出差异性表达的蛋白。通过qRT-PCR、Western blotting和IHC方法在小样本水平上验证差异性表达蛋白,如PYGL,ANXA4,PSMB8,ATP5B。在大样本水平上进一步检测,包括用新技术高通量免疫印迹方法(QDB)检测五十个肾癌病人的肾癌组织及其癌旁肾组织中ANXA4,PYGL,PSMB8和ATP5B的绝对定量。体内验证,用肾细胞癌细胞(786-0)转染siPYGL,转染后的细胞用xCELLigence实时细胞分析仪(RTCA)-DP系统检测细胞增殖和迁移功能。结果:通过质谱方法共检测到2091种蛋白,其中532种蛋白表达在肾癌组织及其癌旁肾组织中具有显著的统计学差异。在50对组织中,肾癌组织的PYGL绝对定量的中位值显著高于癌旁肾组织(1.21 nml/g比0.16 nmol/g,P0.0001,配对 t检验)。PYGL 的 ROC分析显示 AUC为 0.93(P0.001;95%CI 0.87-0.99)。当PYGL临界值为0.35nmol/g时,PYGL的敏感性为92%,特异性为92%,总体准确性为96%。而ANXA4、PSMB8和ATP5B的总体准确率分别为92%、82%、70%。细胞实验显示,敲除PYGL之后,细胞的增殖和迁移功能均有所降低。结论:我们通过定量蛋白质组学方法检测了肾癌组织及其癌旁肾组织中差异性表达蛋白,并对其中多种蛋白进行了分子生物学实验检测,并在群体水平上进行了验证。筛选出了差异性明显并且表达稳定的蛋白-PYGL。进一步分析得到PYGL有可能成为肾癌的抗肿瘤药物新靶点。
【图文】：

图２－１：实验路线逡逑１３逡逑

逦ｐｓｍｂｓ逡逑图２－２：在小范围样本量中检测ＰＹＧＬ、ＡＮＸＡ４、ＰＳＭＢ８和ＡＴＰ５Ｂ的相对表达水平逡逑图２－２．以上图片是用分子生物学实验在小样本上验证差异性表达蛋白。（Ａ）该图为逡逑ｑＲＴ－ＰＣＲ邋实验检测邋ＰＹＧＬ、ＡＮＸＡ４、ＰＳＭＢ８邋和邋ＡＴＰ５Ｂ邋结果图（ｎ＝５），ＡＴＰ５Ｂ，ＰＹＧＬ，逡逑２２逡逑
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.11

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 魏东阳;;蛋白质组学及其应用研究[J];现代商贸工业;2019年16期

2 ;第六届中国蛋白质组学大会在我市召开[J];泰州科技;2009年08期

3 徐哲;李佳霄;徐琳娜;贺花;杨鹏;雷初朝;陈宏;黄永震;;蛋白质组学技术在畜禽遗传育种中的应用与展望[J];中国牛业科学;2018年06期

4 常蕾;王琰;;第十届中国蛋白质组学大会成功召开[J];生命的化学;2019年01期

5 王彦青;韩菲;;蛋白质组学研究热点及展望[J];中学生物教学;2006年03期

6 周倩;朱宏建;;蛋白组学教学内容与教学方式的改革初探[J];课程教育研究;2017年10期

7 彭昌文;蛋白质组学研究进展[J];中学生物教学;2003年03期

8 陈龙;蛋白质组学[J];生物学教学;2000年11期

9 黄毅;万瑛;;第三军医大学第二届蛋白质组学和代谢组学论坛会讯[J];第三军医大学学报;2016年22期

10 田瑞军;;蛋白质组学专刊序言[J];生命的化学;2017年01期

相关会议论文 前10条

1 罗琦;刘凤斌;廖荣鑫;;蛋白质组学与中医病、证的相关性[A];中华中医药学会脾胃病分会第十九次全国脾胃病学术交流会论文汇编[C];2007年

2 李克;苟黎明;邵小宝;朱慧;;蛋白质组学研究中高丰度蛋白去除方法的研究进展[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年

3 李伽诺;姜子涛;李荣;;二氧化钛在磷酸蛋白质组学研究中的应用[A];2009食品科技(北京)论坛会议指南[C];2009年

4 李学任;魏路清;;蛋白质组学技术在肺部疾病应用及进展[A];中华医学会第三届全国间质性肺病暨弥漫性泛细支气管炎学术会议论文汇编[C];2010年

5 张薇;杨拴盈;尚文丽;刘晓丽;周丹菲;蒋梅花;;定量蛋白质组学研究肺腺癌细胞及正常支气管上皮细胞线粒体[A];中华医学会第五届全国胸部肿瘤及内窥镜学术会议论文汇编[C];2011年

6 李学军;;蛋白质组学—药物发现的新途径[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集（第一部分）[C];2002年

7 曾嵘;夏其昌;;蛋白质组学的国内外进展[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年

8 曾嵘;夏其昌;;蛋白质组学研究的一些体会[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年

9 郝佩;刘琪;黄音;林建;杨少友;李亦学;;整合的蛋白质组学数据分析系统[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年

10 梁宋平;张丽军;柳亦松;曹锐;谢锦云;;细胞质膜蛋白质组学研究方法与应用[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年

相关重要报纸文章 前10条

1 本报记者 李惠钰;蛋白质组学精准打击“癌症之王”[N];中国科学报;2019年

2 路秀广;“不安分”的逐梦者[N];科学时报;2011年

3 吴志军　沈基飞;唱响东方红 再揽九天月[N];科学时报;2011年

4 李吉亮;何大澄：“享受探索,享受奋斗”[N];科学时报;2011年

5 本报记者 潘锋;中国蛋白质组学面临的机遇和挑战[N];科学时报;2010年

6 记者 付东红 通讯员 李紫艺;单细胞蛋白质组学研究获突破[N];健康报;2018年

7 本报记者 白毅 通讯员 沈基飞;行进在蛋白质组学的“登月之旅”[N];中国医药报;2014年

8 通讯员 吴志军 王来国;“人类重大疾病的蛋白质组学研究”项目启动[N];光明日报;2002年

9 本报记者 李雪墨;专家看好蛋白质组学研究[N];中国高新技术产业导报;2002年

10 李江;第六届中国蛋白质组学大会召开[N];医药经济报;2009年

相关博士学位论文 前10条

1 孙欣;鸭坦布苏病毒感染细胞蛋白质组学分析及DDX3X对复制的影响[D];华中农业大学;2017年

2 郭金菊;辣椒细胞质雄性不育花药的蛋白质组学分析及CaSEP5基因的功能分析[D];中国农业大学;2018年

3 周毛天;通过定量蛋白质组学研究细菌病原体蛋白MgtC功能以及宿主对SeV病毒感染的应答[D];武汉大学;2015年

4 张勤;基于转录组学、蛋白质组学和代谢组学技术探讨天疱疮发病机制的研究[D];安徽医科大学;2018年

5 谷丽晓;NAD依赖的去乙酰化酶及SOX10功能的蛋白质组学研究[D];清华大学;2017年

6 霍yN;肿瘤细胞顺铂耐药机制的蛋白质组学研究[D];清华大学;2017年

7 苏刚;分泌蛋白及外泌体对肝癌细胞影响的蛋白质组学研究[D];兰州大学;2018年

8 孙金龙;基于蛋白质组学探讨补肾中药对高龄肾虚不孕妇女生育力影响的研究[D];山东中医药大学;2017年

9 王秀臻;柔嫩艾美耳球虫入侵DF1细胞的转录组学及蛋白质组学分析[D];山东农业大学;2018年

10 周荃;精原干细胞（SSCs）的建系及蛋白质组学分析[D];南京医科大学;2015年

相关硕士学位论文 前10条

1 夏季;应用SILAC定量蛋白质组学研究23乙酰泽泻醇B的抗肿瘤机制及核受体Nur77对线粒体活性的影响[D];厦门大学;2017年

2 古锦翠;基于蛋白质组学与免疫学方法的丝绸文物分析鉴定研究[D];浙江理工大学;2019年

3 张媛;基于TMT技术的增殖性糖尿病视网膜病变患者的房水蛋白质组学研究[D];武汉大学;2018年

4 邱鑫;基于血浆蛋白质组学研究黄连治疗2型糖尿病的多靶点作用机制[D];华中科技大学;2018年

5 张海利;通过定量蛋白质组学技术预测潜在的抗肾癌药物新靶点[D];滨州医学院;2018年

6 罗迪;野牛草叶、根对差异光周期的生理应答及其蛋白质组学研究[D];中国林业科学研究院;2018年

7 裘乃麒;基于质谱数据的蛋白质水平质量控制工具的分析研究[D];华东师范大学;2018年

8 李忠晴;橡胶草响应茉莉酸的蛋白质组学研究[D];石河子大学;2018年

9 韩雪;甜菜细胞质雄性不育系的线粒体蛋白质组学分析[D];哈尔滨工业大学;2018年

10 裴悦;猪伪狂犬病毒感染PK15细胞的蛋白质组学研究[D];浙江农林大学;2018年

，

本文编号：2710094