GNAI2对前列腺癌细胞PC-3生物学功能的影响

发布时间：2020-06-16 18:27

【摘要】：目的探讨沉默GNAI2(G protein alpha inhibiting activity polypeptide 2,GNAI2)基因对前列腺癌细胞PC-3增殖、迁移、细胞周期和线粒体膜电位的影响。方法构建能沉默GNAI2基因的重组质粒载体及随机序列对照载体;联合两个包装质粒ps PAX2和p MD2.G,用PEI介导三质粒系统转染293T细胞,包装能够沉默表达GNAI2的慢病毒及随机序列对照的慢病毒;用两组病毒分别转染PC-3细胞,构建沉默表达GNAI2和表达随机序列的细胞模型。分组:PC-3细胞组(NC组),随机序列对照组(LV-SHCON),沉默GNAI2基因组(LV-SHGNAI2);用MTT检测细胞的增殖能力;用划痕实验检测细胞的迁移能力;用PI(Propidium Iodide,PI)染色各组细胞,流式细胞仪检测细胞周期变化;用TMRE(Tetramethylrhodamine ethyl ester,TMRE)染色各组细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化。结果1成功构建携带GNAI2特异siRNA的重组质粒和携带随机序列的重组质粒。2成功包装携带GNAI2特异的si RNA的慢病毒和携带随机序列的慢病毒。3成功构建沉默GNAI2的前列腺癌细胞PC-3模型和携带随机序列的对照细胞模型。4沉默表达GNAI2促进PC-3细胞增殖:24h时各组细胞无明显增殖,差异不显著。48h时各组细胞增殖均有所升高,LV-SHGNAI2组分别与两对照组相比,细胞增殖差异明显(P0.001),NC组和LV-SHCON组之间差异不显著(P=0.214)。72小时时三组细胞增殖较多,LV-SHCON组分别与两对照组相比,差异明显(P0.001),NC组和LV-SHCON组之间差异不显著(P=0.193)。5沉默GNAI2基因抑制了PC-3细胞的迁移能力:在划痕24h后观测并计算发现,LV-SHGNAI2组细胞修复比例为(16.99±1.65),LV-SHCON组修复比例为(57.67±3.17),NC组修复比例为(53.43±2.12),LV-SHGNAI2组的修复比例明显小于两个对照组(P0.001),细胞的迁移能力明显低于两个对照组,NC组和LV-SNCON组细胞修复比例和迁移能力没有明显差异(P=0.074)。6沉默GNAI2基因使处于S期的PC-3细胞比例增加:LV-SHCON组G0/G1期的细胞比例为(55.9±1.72),S期为(32.48±3.66),G2/M期为(8±0.2);LV-SHGNAI2组G0/G1期的细胞比例为(57.62±0.67),S期为(41.27±1.73),G2/M期为(1.8±1.68),与LV-SHCON组相比,LV-SHGNAI2组S期细胞占比增加(P0.05),G2/M期细胞占比减少(P0.05),G0/G1期细胞占比并无变化(P=0.224)。7沉默GNAI2基因使PC-3细胞线粒体膜电位增加:LV-SHCON组细胞线粒体膜电位为(71.39±1.23),LV-SHGNAI2组为(91.08±2.8),差异显著(P0.001)。结论沉默GNAI2基因的表达可以促进PC-3细胞增殖,抑制PC-3细胞迁移,使其S期细胞增多,提高PC-3细胞线粒体膜电位水平,提示GNAI2对PC-3细胞生物学功能有重要影响,在前列腺癌的发生和演进中发挥重要作用。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.25
【图文】：

- 10 -图 1 pLL3.7 质粒图谱Fig.2 pLL3.7 plasmid map2）设计可沉默 GNAI2 的序列及对照的随机序列NCBI 中查询 GNAI2 的基因序列，找到其 mRNA，登录 sidirect（http://sidirect2.rnai.jp）查询其特异性引物，同时登录 sirna（http//sirna.wi.mit.edu）查询引物，将从两个网站查询的引物进行对比，并参照 siRNA 的设计原则（最好为 GN18，其中 GC 含量为 40%-60%，不能出现连续的 AAAA 或者 TTTT）选择最佳引物。最后经过比对以及对 pLL3.7-EGFP 质粒载体的酶切位点分析，再在两侧分别设计

- 21 -图 2 a：DNAsis 软件比对显示敲低序列与官方序列完全吻合。b：Chromas 显示随机序列DNA 峰形规则。c：DNAsis 软件比对显示随机序列与官方序列完全吻合。d：Chromas 显示随机序列 DNA 峰形规则Fig.2 a: Result compared by DNAsis shows that the knockdown sequence is fully consistent. b:Chromas shows the DNA peak of knockdown sequence is regular.c: Result compared by DNAsisshows that the random sequence is fully consistent.d: Chromas shows the DNA peak of knockdownsequence is regular.1.2.2 沉默组（LV-SHGNAI2）和随机序列对照组（LV-SHCON）慢病毒包装成功

【参考文献】

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本文编号：2716401