CTLA4Ig与CD40Ig逆转录病毒局部转染供肾对异种鼠肾移植排斥反应的影响

发布时间：2020-06-23 17:48

【摘要】：【目的】 通过阻断CD28-B7和CD40-CD40L共刺激通路，经PLNCX2-FLAG-CTLA4Ig和PLNCX2-HA-CD40Ig双基因包装成逆转录病毒后局部转染入豚鼠肾脏，观察CTLA4Ig和CD40Ig局部转染对豚鼠到SD大鼠异种肾移植免疫耐受的诱导作用，为防治异种肾移植免疫排斥反应寻找新的途径。 【方法】 选用雄性SD大鼠（12-14周龄）、雄性豚鼠（12-14周龄）各40只，随机分为4组（每组SD大鼠、豚鼠各十只）。手术方式为将CTLA4Ig和CD40Ig逆转录病毒基因局部转染豚鼠肾脏，左侧肾脏异位移植到SD大鼠颈部，右侧肾脏冰块保存。第1组为空载体逆转录病毒对照组（A组）；第2组为CD40Ig基因逆转录病毒转染组（B组）；第3组为CTLA4Ig基因逆转录病毒转染组（C组）；第4组为CTLA4Ig和CD40Ig双基因逆转录病毒转染组（D组）。采用Westen bloting检测豚鼠右侧肾脏逆转录病毒转染效率。观察各组受鼠术后移植肾存活时间、受鼠存活时间。采用HE染色观察术后各组大鼠移植肾排斥反应级别，免疫组化技术检测Bax蛋白的表达，RT-PCR检测bcl-2/Bax mRNA的表达，并用流式细胞仪检测移植肾细胞凋亡率。 【结果】 1、Western blotting 供肾局部转染CD40Ig或CTLA4Ig后，其组织中可见CD40Ig和（或）CTLA4Ig表达。A组无CD40Ig和CTLA4Ig表达，B组可见CD40Ig表达，C组可见CTLA4Ig表达，D组可见CD40Ig和CTLA4Ig都表达。 2.移植肾及受鼠存活时间 A组大鼠移植肾存活时间为（8.1±2.1）d，SD大鼠的存活时间为(9.5±2.3)d； B组、C组和D组移植肾的存活时间分别为(13.1±2.2)d、（12.4±2.6)d和（16.6±3.0)d,受鼠存活时间为(14.4±3.1)d、（14.5±3.3)d和（18.8±2.7)d，均明显长于A组（P0.05)，其中D组移植肾及SD大鼠存活时间最长，与其他3组比较，差异均有统计学意义（P0.05)。而B、C两组之间比较无明显统计学差异（P0.05）。 3. HE染色 A组术后移植肾组织HE染色可见大量淋巴细胞浸润，Banff07移植肾病理分级为IIB-III级，提示移植肾排斥反应强烈。B组、C组也可见淋巴细胞浸润，但表达强度低于A组，Banff07移植肾病理分级为IIA-III级。而D组淋巴细胞浸润最少，Banff07移植肾病理分级为IA-IIB级,明显低于其他三组。 4.免疫组织化学检测 A组移植肾组织Bax表达都呈棕褐色，为强阳性表达，强阳性率100％，B组、C组移植肾组织强阳性率分别为60％和80％，D组有1例成强阳性反应，4例成弱阳性反应，强阳性率20％（P 0.05)。 5.RT-PCR结果 RT-PCR结果显示,B、C、D组移植肾组织Bax mRNA的表达明显低于A组，其中以D组移植肾组织Bax mRNA的表达最低，bcl-2mRNA表达则相反，D组表达最高，A组表达最低（P0.05）。而B、C两组之间比较无明显统计学差异（P0.05）。 6.移植肾细胞凋亡情况 B、C两组细胞凋亡率为（24.34±2.78）%、（26.21±2.69）%，明显低于A组（54.69±6.25）%（P0.05），而D组细胞凋亡率最低，为（15.03±1.21）%，与A、B、C组相比有显著差异（P0.05）。而B、C两组之间比较无明显统计学差异（P0.05）。 【结论】 1、CTLA4Ig和CD40Ig基因逆转录病毒局部转染肾脏均具有延长移植肾存活时间的作用，但两者本身并没有明显差异。 2、同时转染CTLA4Ig和CD40Ig双基因逆转录病毒，能显著减轻异种移植肾的排斥反应，延长移植肾的存活时间。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R699.2

【参考文献】

相关期刊论文 前8条

1 王熹,闵志廉,朱有华,齐隽;异种肾移植间接体内模型的建立及病理学观察[J];第二军医大学学报;1997年03期

2 黄赤兵,吴军,张艮甫,陈希炜,贺伟峰;用负载供体抗原的致耐受性树突状细胞延长大鼠移植肾存活[J];第三军医大学学报;2003年21期

3 郭泽雄,苏泽轩,钟玲,丁泓文;一种简易异种肾移植动物模型的建立[J];广东医学;2004年09期

4 郭泽雄,苏泽轩;中华眼镜蛇毒抑制豚鼠至大鼠异种肾移植超急性排斥反应的实验研究[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2000年06期

5 张t

本文编号：2727687