MicroRNA-301a-3p过表达通过靶向RUNX3促进前列腺癌细胞侵袭和增殖

发布时间：2020-06-25 13:37

【摘要】：微小RNA(micro RNAs)异常表达与肿瘤发生过程相关,Micro RNA-301a-3p(mi R-301a-3p)已被报道在多种人类癌症中表达失调并参与癌症发生发展,但是其在前列腺癌中的作用鲜有报道,本研究旨在阐明mi R-301a-3p在前列腺癌中的作用和分子机制,为前列腺癌治疗提供潜在治疗靶点。本研究分成以下3个部分进行:第一部分mi R-301a-3p和RUNX3在前列腺癌细胞和组织中的表达研究。目的:mi R-301a-3p和RUNX3分别在前列腺癌细胞和组织中的表达情况。方法:收集标本,包括15例前列腺癌癌组织及其邻近的正常前列腺组织。购入前列腺癌细胞LNCa P、PC-3、DU-145及正常前列腺上皮细胞RWPE-1。采用荧光定量PCR检测前列腺癌组织、细胞中及正常前列腺组织、细胞中mi R-301a-3p和RUNX3 m RNA的表达水平,并对其进行统计学分析。结果:前列腺癌组织及前列腺癌细胞中mi R-301a-3p表达升高,RUNX3表达降低。第二部分mi R-301a-3p对前列腺癌细胞生物学行为的影响。目的:mi R-301a-3p对前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法:将合成的mi R-301a-3p mimics和anti-mi R-301a-3p转染至前列腺癌细胞,MTT实验比较两组增殖情况并进行统计学分析。平板克隆实验观察细胞中比较mi R-301a-3p mimics及anti-mi R-301a-3p对前列腺癌细胞克隆形成数目的影响并进行统计学分析。使用Transwell侵袭实验将mi R-301a-3p mimics及anti-mi R-301a-3p转染细胞,与对照组比较结晶紫染色阳性细胞数目并进行统计学分析。结果:mi R-301a-3p过表达促进前列腺癌细胞增殖、侵袭和转移,沉默mi R-301a-3p表达抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和转移。第三部分mi R-301a-3p靶基因及其促癌机制的初步研究。研究目的:mi R-301a-3p的靶基因以及mi R-301a-3p通过靶基因的促癌机制。研究方法:构建RUNX3高表达质粒,明确RUNX3蛋白在mi R-301a-3p引起的前列腺癌细胞生物学功能中的作用。突变RUNX3 3’UTR,利用荧光素酶表达质粒探讨3’UTR区对mi R-301a-3p调控RUNX3表达的影响。Western方法检测RUNX3蛋白表达水平。进行统计学分析。研究结果:mi R-301a-3p可直接靶向调控RUNX3基因,mi R-301a-3p过表达显著降低前列腺癌细胞RUNX3蛋白表达。mi R-301a-3p过表达增加前列腺癌细胞侵袭的作用可以被RUNX3过表达所降低。mi R-301a-3p过表达增加Wnt通路活性,以及增加Wnt下游基因c-myc和cyclin D1的表达水平,相反,抑制mi R-301a-3p表达降低Wnt通路活性,以及降低Wnt下游基因c-myc和cyclin D1的表达水平。结论:mi R-301a-3p在前列腺癌组织和癌细胞系明显表达升高,并通过降低RUNX3的表达作用到Wnt信号通路,增加前列腺癌细胞的增殖、侵袭能力。mi R-301a-3p在前列腺癌中的关键作用以及mi R-301a-3p和RUNX3的直接关系。mi R-301a-3p通过靶向调控RUNX3促进前列腺癌增殖和侵袭,提示其可能作为前列腺癌的潜在治疗靶点。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.25
【图文】：

前列腺癌,表达水平,标本

qRT-PCR 检测前列腺癌组织和癌旁组织标本 miR-301a-3p mRNA 表达水织中 miR-301a-3p mRNA 表达水平高于癌旁组织，二者比较差异具有统计＜0.01。

表达水平,前列腺癌,标本,前列腺

qRT-PCR 检测前列腺癌组织和癌旁组织标本 RUNX3 mRNA 表达水平。 RUNX3 mRNA 表达水平低于癌旁组织，二者比较差异具有统计学意义列腺癌细胞中 miR-301a-3p 和 RUNX3 表达水平的检测，进一步利用 LNCaP、PC-3 和 DU-145 前列腺癌细胞检测前a-3p 的表达水平变化，结果如图 1.3 显示，与 RWPE-1 前列腺

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