MBL与FGFR4的相互作用及其对人肾系膜细胞作用的研究

发布时间：2020-06-27 08:41

【摘要】：目的:IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是世界上最常见的肾小球肾炎,由于其发病机制复杂,因此探讨其发生进展的机制、以及寻找其特异性的治疗靶点显得尤为重要。甘露聚糖结合凝集素(MBL)在近些年逐渐成为研究热点,其参与多种疾病的发生及进展,但其在IgA肾病中的作用机制并不明确。课题组通过前期实验研究证实肾小球系膜区MBL沉积和尿液高MBL的水平与Ig A肾病的疾病发展以及不良预后相关,且体外实验发现MBL能促进人肾系膜细胞发生上皮间质转化(EMT),生物信息学预测MBL可能与成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)相互作用,进而推测其相互作用能够导致或促进系膜细胞损伤而致严重肾损伤。本研究将在既往研究基础上,进一步证实MBL与FGFR4的相互作用,并探讨这种相互作用对人肾系膜细胞的损伤效应。研究方法:本实验收集了186例经肾活检证实的IgAN患者的血清标本,通过ELISA法检测IgAN患者血清中MBL的水平;通过肾活检组织免疫荧光、以及系膜细胞免疫荧光方法检测MBL与FGFR4的共沉积;免疫共沉淀实验证实MBL与FGFR4的相互作用;通过ELISA法检测MBL与FGFR4相互作用并对人肾系膜细胞上清中炎症因子表达的影响。结果:1、血清MBL ELISA实验结果显示IgAN患者组中血清MBL水平要显著高于健康对照组(716.2±23.14 ng/ml vs 440.7±40.14 ng/ml,P0.001);2、肾活检组织免疫荧光实验结果发现MBL与FGFR4均可沉积于肾小球系膜区,且二者可以共沉积;3、人肾系膜细胞免疫荧光实验结果显示三组不同处理因素的系膜细胞均存在MBL与FGFR4的表达,MBL与FGFR4在核和浆均表达以及共沉积。高浓度MBL(800ng/ml)血清+rMBL(1μg/ml)组二者的表达强度要高于低浓度MBL(400ng/ml)血清组;低浓度MBL血清组二者的表达强度要高于正常血清对照组。4、内源性免疫共沉淀实验结果发现MBL与FGFR4能够相互作用,并且这种相互作用在高浓度MBL血清+rMBL(1μg/ml)组比较明显;5、人肾系膜细胞上清液IL-6的蛋白水平在正常对照组、低浓度MBL血清组、高浓度MBL血清+rMBL(1μg/ml)组逐渐增高(高浓度MBL血清+rMBL vs.低浓度血清组,162.80±6.45pg/ml vs.37.16±1.80 pg/m,P0.001;低浓度血清组vs.正常血清对照组,37.16±1.80 pg/m vs.28.00±2.67 pg/ml,P0.05)。系膜细胞MCP-1的蛋白水平显示出类似的趋势(高浓度MBL血清+rMBL vs.低浓度血清组,195.2±8.23 pg/ml vs.58.23±3.40 pg/ml,P0.001;低浓度血清组vs.正常血清对照组,58.23±3.40 pg/ml vs.38.03±5.10 pg/ml,P0.01),组间差异均具有统计学意义。结论:1、MBL与FGFR4在肾小球系膜区以及人肾系膜细胞中存在共沉积;2、人肾系膜细胞内源性MBL与FGFR4存在相互作用;3、MBL与FGFR4相互作用能够促进系膜细胞炎症因子的分泌,并可能导致肾脏损伤。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R692.31
【图文】：

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中国医科大学硕士学位论文3 结果SA 法检测 IgA 肾病患者血清 MBL 水平测 IgAN 患者血清中 MBL 的蛋白表达情况，我们首先在遵循患下，收集了 186 例经肾活检病理诊断的 IgAN 患者血清，以及血清，置于-80℃冰箱储存备用，随后采用 Human MBL Elisa 试BL 水平的检测，并根据检测出的 MBL 浓度的高（>800ng/ml/ml）用于后续的细胞实验。结果显示 IgAN 患者组(IgAN group）要显著高于健康对照组（Control group）（716.2±23.14 ng/ml vs 440..001），两组间差异具有统计学意义。

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图 3.2 激光共聚焦显微镜检测 IgA 肾病患者肾活检组织MBL 和 FGFR4 的表达（×200）图中 MBL 采用的是绿色荧光染色标签，FGFR4 采用的是红色荧光染色标签，DAPI 采用是蓝色荧光染色标签（即核染色），Merge 表示三者重合的结果；（-）表示阴性对照组，即IgAN 患者肾小球中无 MBL 与 FGFR4 表达，（+）表示阳性组，即在 IgAN 患者肾小球系膜中存在 MBL 与 FGFR4 共表达3.3 免疫荧光法检测MBL与FGFR4在体外培养人肾系膜细胞中的共沉积为了进一步验证 MBL 与 FGFR4 在人肾系膜细胞的共沉积，我们将人肾系膜胞按照不同的处理因素进行分组，并作用 72 小时，随后进行系膜细胞免疫荧光重染色，并采用激光共聚焦显微镜进行实验结果观察，结果显示三组不同处理因

【参考文献】