microRNA-15b在腹膜间皮细胞转分化中的作用与机制研究

发布时间：2020-06-29 12:57

【摘要】：目前终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)的一体化治疗中,血液透析和腹膜透析是两种重要的治疗方式。相对于血液透析而言,腹膜透析具有保护残余肾功能、提供持续超滤、利于患者血压控制与液体平衡、中分子物质清除效果好、患者得以回归社会等优点。在腹膜透析过程中,各种急慢性原因所导致的腹膜病变可引起腹膜纤维化,并最终导致腹膜超滤失败,这是患者退出腹膜透析的重要原因之一。其中,腹膜间皮细胞的上皮-间充质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)在腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)相关性腹膜纤维化中起关键作用,其主要表现为上皮细胞标志物如E-cadherin、ZO-1等表达降低,而间充质标志物如Vimentin、α-SMA等表达升高。研究显示,miRNAs参与了多种细胞的EMT过程,进而调节器官或组织的纤维化,但其在腹膜间皮细胞转分化中的扮演的角色及其可能的机制尚未完全明确,仍有待进一步研究。因此,是否能通过调节miRNAs的表达,进而抑制腹膜间皮细胞EMT的发生是腹膜纤维化预防和治疗的新方向。目的:探讨microRNA-15b对人腹膜间皮细胞向上皮间充质转分化(EMT)的调节作用及可能的分子机制。方法:1.进行预实验,用不同浓度的高糖溶液刺激人腹膜间皮细胞株(HMrSV5),筛选最佳的高糖刺激浓度及时间点。2.使用138mmol/L高糖溶液刺激HMrSV5细胞24h,观察高糖溶液对HMrSV5细胞microRNA-15b表达的影响。3.转染 microRNA-15b 模拟物(microRNA-15b mimic)使 HMrSV5 中microRNA-15b 过表达或转染 microRNA-15b 抑制剂(microRNA-15b inhibitor)抑制HMrSV5中microRNA-15b的表达,再给予138mmol/L高糖溶液刺激24小时,采用实时荧光定量PCR、western印迹等方法,观察过表达microRNA-15b或抑制表达microRNA-15b对高糖诱导的HMrSV5细胞EMT相关蛋白和基因表达的影响。4.观察调节microRNA-15b后,Smad通路蛋白的mRNA和蛋白表达的改变。结果:1.根据细胞生物活性及蛋白表达情况选择最佳刺激为138mmol/L高.糖溶液,最佳时间为24 h。2.138mmol/L高糖溶液的刺激,可使HMrSV5中microRNA-15b表达明显升高(P0.05)。3.转染microRNA-15b模拟物后高糖诱导下的上皮标志物E-cadherin蛋白的表达明显降低,并且高糖引起的间充质标志物Vimentin及纤维化标记Fibronectin(FN)inRNA和蛋白表达增加(P0.05);而转染microRNA-15b抑制剂则结果相反。4.转染microRNA-15b mimic可明显抑制高糖诱导下腹膜间皮细胞的Smad7mRNA及蛋白水平的表达(P0.05),而转染microRNA-15b inhibitor可明显增强高糖诱导下腹膜间皮细胞的Smad7 mRNA及蛋白水平的上调(P0.05)。结论:microRNA-15b在高糖刺激腹膜间皮细胞转分化过程中上调,其可能通过抑制Smad7的表达从而促进腹膜间皮细胞上皮间充质转分化进程。microRNA-15b可能成为防治腹透相关性腹膜纤维化的新靶点。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R692.5
【图文】：

腹膜,间充质,间皮细胞,转分化

以及细胞间滞留液体层构成了腹膜溶质转运的主要屏障。而ＰＤ患者的腹膜结构逡逑发生改变，包括间皮细胞层的损失，成纤维细胞数量增加，内皮细胞纤维化和逡逑血管数量的增加（如图１）邋［５］。逡逑人腹膜间皮细胞（ｈｕｍａｎ邋ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ邋ｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ，ＨＰＭＣ）是构成腹膜表层逡逑主要的细胞群体，其主要生理功能是参与血管与腹腔之间的溶质交换，分泌相关逡逑细胞因子，调节腹膜微循环等？。现有的研宄表明，腹膜间皮细胞上皮－间充质转逡逑化（ＥＭＴ）是腹膜纤维化的重要始动环节逡逑ＥＭＴ是指极性的上皮细胞通过特定程序转化为具有强移动能力并可在细胞逡逑基质之间自由移动及间质相关表型的细胞的生物学过程，其在生物机体的形成逡逑１逡逑

间充质,关键步骤,上皮,转分化

蛋白组成的基底膜）。（４）细胞迁移和侵袭能力的增加。因间皮细胞形态的变逡逑化、细胞与基质之间粘附关系的丧失、基底膜降解及ａ－ＳＭＡ的表达增加，最终逡逑导致转分化细胞越基底膜游走于间质及聚集的能力大大增强。（如图２）逡逑ＨＧＦ，邋ＢＭＰ－７逦Ｄｅ邋ｎｏｖｏ邋ａＳＭＡ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ逡逑Ｌｏｔｓ邋ｏｆ邋ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ａｄｈｅｓｉｏｎ逦ａｎｄ邋ａｃｔｉｎ邋ｒｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ逡逑你屮邋今＂ｃｉｊ。。ａ邋丨邋0邋？。。反＇Ａ。逦ＩＰＡ逡逑■ｎｎ．邋ｔ逦ｉｎ逦Ｉ逡逑Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ逦Ｅ－ｃａｄｍ逦／逦ｉ逡逑ｖ逦ｙ逦＇逦１邋Ｉ逦邋ＭＭＰ＊９邋ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ逡逑＂＂＂＇ｂ￣￣ｄ￣￣Ｈ￣＾￣逦Ａｎｇｌｌ邋ｂｌｏｃｋａｄｅ逡逑Ｄ逦０逦ＴＢＭ邋ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ逡逑滙樐逦ｎｎ厂逡逑Ｅｎｈａｎｃｅｄ邋ｃｅｌｌ邋ｍｉｇｒａｔｉｏｎ逦＾逡逑ａｎｄ邋ｉｎｖａｓｉｏｎ逦？邋？逡逑ｉ邋￣￣逦｜ｙｒ逦ＭＭＰ－２逡逑？逡逑／逡逑Ｍｙｏｆｔｂｆｏｂｉｗｔ’逦ＲＯＣＫ邋ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ逡逑图２：上皮－间充质转化中的四个关键步骤逡逑Ｙａｎｅｚ－Ｍｏ邋Ｍ等人在２００３年首先提出腹膜透析中出现腹膜间皮细胞ＥＭＴ的逡逑现象［９］。他们对腹透患者的随访研宄中发现，在腹膜透析的早期，患者的腹膜组逡逑织就会出现ＥＭＴ，从流出的腹透液中收集培养的腹膜间皮细胞里有部分表现出逡逑纤维细胞样的形态学改变，并且表现出不同程度转分化细胞的特征。ＤｅｌｆＭ等人逡逑的研宄进一步证实了这一观点

【参考文献】