前列腺素E2受体1亚型激活P38MAPK通路介导阿霉素诱导的足细胞损伤

发布时间：2020-07-13 05:38

【摘要】：目的探讨前列腺素E2受体1亚型(EP1)对阿霉素(ADR)诱导的肾小球足细胞的影响及可能机制。方法体内实验1.动物分组:(1)对照组;(2)ADR组;(3)EP1激动剂17-phenyl PGE2+ADR组;(4)EP1拮抗剂SC-19220+ADR组。2.小鼠尾静脉注射ADR(10mg/kg)构造肾病综合征模型。3.肾病综合征模型建立后,激动剂和拮抗剂组分别给予相应药物喂养,剂量为17-phenyl PGE2(1μg/g),SC-19220(25μg/g);对照组及ADR组小鼠给予正常饮水,持续6周。4.建模6周后处死老鼠,留取尿液、血液和肾组织。检测尿蛋白变化、血生化改变、肾脏病理改变、足细胞相关蛋白的表达变化及足细胞电镜改变。体外实验1.体外培养小鼠肾小球足细胞。2.细胞分组:(1)对照组;(2)ADR组(0.2μmol/L);(3)激动剂组:不同浓度EP1激动剂17-phenyl PGE2(0.1、1、10μmol/L)+ADR组;(4)拮抗剂组:不同浓度EP1拮抗剂SC-19220(0.1、0.5、1μmol/L)+ADR组。3.CCK-8法检测足细胞增殖。4.ELISA法检测足细胞中PGE2含量。5.间接免疫荧光法检测足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP在足细胞中的定位。6.实时定量PCR法及Western印迹法检测足细胞中nephrin、podocin、CD2AP、环氧化酶2(COX2)m RNA及蛋白的表达。7.Western印迹法检测p38MAPK活性变化。8.流式细胞术检测足细胞凋亡。结果体内研究1.与对照组相比,ADR组出现明显蛋白尿、血生化及肾脏病理改变(P0.05);17-phenyl PGE2干预后病变加重,而SC-19220可减轻ADR所致肾损伤,差别具有统计学意义(P0.05)。2.免疫组化结果显示,ADR组足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP表达与对照组相比显著降低(P0.05);17-phenyl PGE2可进一步抑制其表达,而SC-19220干预后可以得到改善,差别具有统计学意义(P0.05)。3.电镜结果显示,ADR组小鼠足细胞出现显著的足突紊乱、融合,激动剂干预后上述表现加重,而拮抗剂干预则可以减轻足细胞损伤,抑制足突融合。体外研究1.与对照组相比,ADR组足细胞增殖能力显著减弱(P0.05)。与ADR组相比,17-phenyl PGE2呈剂量依赖性抑制足细胞增殖(P0.05);而SC-19220干预后,足细胞增殖能力明显增强,差别具有统计学意义(P0.05)。2.与对照组相比,ADR组足细胞中PGE2、COX2表达增加(P0.05)。与ADR组相比,17-phenyl PGE2呈剂量依赖性增加PGE2、COX2的表达(P0.05);而SC-19220干预后,PGE2、COX2表达显著减少,差别具有统计学意义(P0.05)。3.与对照组相比,ADR组足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP m RNA表达下降(P0.05),17-phenyl PGE2干预后,nephrin、podocin、CD2AP m RNA表达进一步下降,呈剂量依赖性(P0.05);SC-19220干预后,nephrin、podocin、CD2AP m RNA表达显著增加,差别具有统计学意义(P0.05)。4.与对照组相比,ADR组足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP蛋白表达下降(P0.05);与ADR组相比,17-phenyl PGE2呈剂量依赖性抑制nephrin、podocin、CD2AP蛋白表达(P0.05);而SC-19220干预后,nephrin、podocin、CD2AP蛋白表达显著增加,差别具有统计学意义(P0.05)。5.与对照组相比,ADR组p38MAPK活性增加,足细胞凋亡显著增多(P0.05);与ADR组相比,17-phenyl PGE2呈剂量依赖性促进p38MAPK活化及足细胞凋亡(P0.05);而SC-19220干预后,可呈剂量依赖性抑制p38MAPK活性,抑制足细胞凋亡(P0.05)。加入p38MAPK抑制剂(10mmol/L)可以减轻EP1激动剂对足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP表达的抑制作用。结论EP1受体可能通过激活p38MAPK信号通路抑制足细胞相关蛋白nephrin、podocin、CD2AP的表达,介导ADR诱导的足细胞损伤,而抑制EP1受体对足细胞有保护作用。
【学位授予单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R692
【图文】：

小鼠,尿蛋白,拮抗剂,尿白蛋白

情况相比，ADR 组小鼠在造模结束后出现精神不激动剂组小鼠上述症状加重，而拮抗剂组小鼠指标相比，ADR 组小鼠尿白蛋白/肌酐比值显著升蛋白尿进一步加重（P<0.05），而拮抗剂组小<0.05）。见图 1。

PAS染色,光镜,形态变化,拮抗剂

Scr 升高更明显（P<0.05）；而拮抗剂组 Alb 明显升高，Ch、TG、BUN、Scr 均显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表 1。表 1 各组小鼠血清 TG、Ch、 Alb、BUN、Scr 水平（ X S ，n=8）组别 TG(mmol/L) Ch(mmol/L) Alb(g/L) BUN(mg/dl) Scr(μmol/L)对照组 0.66±0.21 3.07±0.65 33.5±0.49 9.98±0.34 9.83±0.88ADR 2.52±0.35a5.59±0.71a22.23±0.66a15.06±0.16a16.93±0.29a17-phenylPGE2+ADR 3.67±0.58b7.59±0.85b18.87±0.58b21.05±0.25b21.9±0.65bSC-19220+ADR 1.12±0.14b4.14±0.76b28.10±0.73b11.98±0.33b12.44±0.59b注：与对照组相比，ap<0.05；与 ADR 组相比，bp<0.053.3 各组小鼠肾脏病理学改变光镜下 PAS 染色显示，与对照组相比，ADR 组肾小球硬化、肾小管萎缩显著并且小管中可见蛋白管型。激动剂组肾损伤较 ADR 组进一步加重，并且出现大量蛋白管型；相反，拮抗剂组肾脏上述病理改变得到显著改善。见图 2。

免疫组化,中足,相关蛋白,南通大学

南通大学硕士学位论文第三章结果3.4 免疫组化检测肾脏中足细胞相关蛋白的表达变化与对照组相比，ADR 组小鼠肾脏中足细胞相关蛋白 nephrin、podocin、CD2AP表达显著降低（P<0.05）。激动剂组表达进一步下降，拮抗剂干预组蛋白表达显著增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。见图 3。

【参考文献】