精索静脉曲张患者精浆中不育相关蛋白的筛选及验证

发布时间：2020-07-17 16:12

【摘要】：目的:近年来,越来越多的男性遭受不育症的困扰,男性不育成为社会关注的热点。精索静脉曲张是引起男性不育最常见的原因之一,大约40%成年男性的原发性不育及80%的继发性不育患有精索静脉曲张。精索静脉曲张引起血流淤滞,可影响睾丸的温度调控,改变精子生成的微环境,进而影响精子生成;另一方面曲张的静脉造成生精细胞的慢性缺氧和活性氧物质过多产生,使精子过度凋亡,精子数量减少。尽管精索静脉曲张会影响患者的生育能力,但有精索静脉的患者并不都是不育的,造成不育的机制仍不明确。蛋白质组学作为一种先进的研究技术,可以在分子水平研究细胞或组织内的蛋白功能和代谢过程。同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)在科研中广泛受青睐,特别是在疾病的相关蛋白领域中具有较高灵敏度和特异性。精浆是男性附属性腺的分泌物,富含蛋白质和各种化学成分,是潜在的男性不育和生殖系统疾病的生化标志物。本实验是以先前的研究为基础,利用蛋白组学技术进一步对不育合并精索静脉曲张患者和正常生育者精浆中的蛋白进行分析,检测出明显表达差异的蛋白,通过研究差异蛋白的进行分子功能,以期深入了解精索静脉曲张导致男性不育的分子机理。同时,利用蛋白免疫印迹技术(Western blot)对筛选出的差异表达蛋白进行验证,获取精索静脉曲张致不育的蛋白标志物,为临床治疗男性不育提供帮助。方法:收集不育合并精索静脉曲张患者的精液标本30份、正常生育男性精液标本40份及单纯左侧精索静脉曲张患者的精液标本25份,提取出精浆作为实验的标本。运用iTRAQ试剂盒标记实验标本,117标记不育合并精索静脉曲张患者组的精浆标本,114标记正常生育组的精浆标本,进行蛋白组学分析。使用Proteome Discoverer1.3软件对得到的质谱数据进一步分析,选择上调大于1.5倍,下调小于0.7标准进行筛选。再对差异表达蛋白进行分子功能学的分析,并从中挑选出可作为不育标志物的蛋白,分别在3组的精浆中进行Western blot实验,图像的灰度值使用image pro plus 7.0软件进行分析记录。结果:差异表达的蛋白共筛选出39种,其中上调蛋白22种,下调蛋白17种。蛋白的分子功能共有14种,其中主要体现在蛋白结合、催化活性及结构分子活性等方面。选取上调表达的HSP70,Bax,S100A12三种蛋白作为验证对象。Western blot实验结果发现HSP70、Bax及S100A12三种蛋白在不育合并精索静脉曲张组表达最高,单纯左侧精索静脉曲张组表达次之,正常生育组表达最低。结论:精索静脉曲张可影响精浆蛋白的表达,可能主要通过影响蛋白的结合、催化活性及结构分子活性等功能诱发不育。HSP70、Bax及S100A12三种蛋白的在精浆中的异常表达与精索静脉曲张影响男性生育具有显著的相关性,可以初步作为精索静脉曲张患者的不育标记物。对于临床型精索静脉曲张的患者特别是有生育要求者,积极治疗以保护生育能力。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R697.24

【参考文献】