持续、波动高糖环境及艾塞那肽对JNK信号通路介导的人肾小球系膜细胞凋亡的作用

发布时间：2020-07-18 13:47

【摘要】：目的:1、人肾小球系膜细胞(human renal mesangial cells,HRMC)的体外培养及其生长状态观察。2、研究正常糖、持续高糖及波动高糖培养对人肾小球系膜细胞生长状态的影响,比较其凋亡率、增殖率的差异。3、探究JNK信号通路在人肾小球系膜细胞凋亡过程中的激活情况及GLP-1受体激动剂类药物艾塞那肽的抗细胞凋亡作用。4、探究GLP-1受体激动剂类药物艾塞那肽对体外人肾小球系膜细胞的保护作用,探讨其机制,为其应用于糖尿病肾病的临床治疗提供理论依据。方法:1、进行人肾小球系膜细胞的体外培养,并在倒置显微镜下观察细胞形态。2、将人肾小球系膜细胞分为6组干预:1组:用正常糖浓度(5.6mmol/L)培养基持续培养、2组:用高糖浓度(25mmol/L)培养基持续培养、3组:用波动糖浓度(5.6mmol/L、25mmol/L交替)培养基培养(先用高糖浓度培养基培养3h,再用正常糖浓度培养基培养2h,一天中重复3次,然后正常糖浓度培养基过夜)、4组:用正常糖浓度(5.6mmol/L)培养基持续培养基础上加用终浓度为100nmol/L的艾塞那肽、5组:用高糖浓度(25mmol/L)培养基持续培养基础上加用终浓度为100nmol/L的艾塞那肽、6组:用波动糖浓度(5.6mmol/L、25mmol/L交替)培养基培养(先用高糖浓度培养基培养3h,再用正常糖浓度培养基培养2h,一天中重复3次,然后正常糖浓度培养基过夜)基础上加用终浓度为100nmol/L的艾塞那肽。6组分别干预24小时。在倒置显微镜下观察6组细胞形态学变化,并拍照记录;cck8法测定6组细胞的增殖率;RT-PCR法测定各组细胞c-junmRNA的相对表达量;Western blot法测定各组细胞C-JUN蛋白的相对表达量;并利用SPSS软件进行单因素方差分析。结果:1、人肾小球系膜细胞体外传代培养生长状态良好。2、倒置显微镜下观察:低倍镜下观察未见明显差异,波动组及波动加药组细胞形态略不规则,细胞膜略模糊;高倍镜下波动组及波动加药组细胞胞内颗粒增多。3、cck8测增殖率:正常糖组的增殖率大于高糖组及波动组并有统计学差异,而从趋势上看波动组的增殖率要小于高糖组、两者没有统计学差异。对于GLP-1受体激动剂能否在不同刺激下提高增殖率,cck8没有在三组比较中全部得出具有统计学意义的结论,但大致趋势是加入GLP-1受体激动剂后细胞增殖率出现升高。4、RT-PCR:正常糖组c-jun基因的相对表达量高糖组波动组但无统计学差异,对于GLP-1受体激动剂能否在不同刺激下降低c-jun基因的相对表达量发挥抗凋亡作用,RT-PCR没有在三组比较中得出具有统计学意义的结论。5、Western blot:对于不同糖浓度及GLP-1受体激动剂能否影响c-jun蛋白的相对表达量,Westen bolt没有在六组比较中得出具有统计学意义的结论,加入GLP-1受体激动剂后c-jun蛋白的相对表达量无统计学差异。6、结论:不能得出在高糖和波动糖的刺激下,人肾小球系膜细胞中的内质网应激相关凋亡通路之一JNK通路出现了不同程度的激活。不能得出在艾塞那肽干预下,人肾小球系膜细胞中的内质网应激相关凋亡通路之一JNK通路出现了抑制。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.2;R692.9
【图文】：

双磷酸,级联反应,外界刺激,硕士学位论文

天津医科大学硕士学位论文前能稳定[30、31]。内质网通路涉及诸多包括 CHOP、JNK、caspase-12 在内的信号导通路，不同通路具有选择性且在凋亡过程中并非同时激活，内质网应激的发因素、细胞类型和细胞状态不同可能导致不同信号通路的激活。本实验主研究 IRE-1/JNK 途径，具体的 IRE-1 在无外界刺激时呈单体形式，较弱外界刺后其与 Bip 分离并形成有活性的二聚体并缓解内质网应激。在较强刺激下 I被持续激活并与 TRAF2 和 ASK1 形成复合物，通过 3 个级联反应双磷酸化 JN活化的 JNK 进入细胞核并对其下游转录因子 AP-1（包括 c-jun、junB、c-fos、ATEIK-1）和 P53 磷酸化最终诱导凋亡。

肽类激素,L细胞,生理状态,食物

JNK 通路GLP-1 是一种生理状态下受到食物刺激后由主要分分泌的含 37 个氨基酸残基的肽类激素[32]，基础状态下DPP-Ⅳ酶降解。GLP-1 受体激动剂与 GLP-1 同源、与受体Ⅳ酶降解，从而大大延长作用时间并增加其生物学效场的主要有短效的艾塞那肽和长效的利拉鲁肽。GLP-1构的 G 蛋白偶联受体，属促胰泌素受体样家族，广泛胞、胰岛细胞在内的全身多种组织、细胞。其主要作食从而减轻体重，作用于下丘脑并抑制食欲，刺激胰制胰高血糖素分泌减少糖异生，促进胰岛素分泌[33、3存在，艾塞那肽作为 GLP-1 受体激动剂类药物对肾脏、枢神经系统、骨代谢、能量代谢均可产生不同影响。对肾脏疾病产生非常重要的影响并延缓糖尿病肾病的肾小球内皮细胞、肾小球系膜细胞、近端肾小管细胞、

持续、波动高糖环境及艾塞那肽对JNK信号通路介导的人肾小球系膜细胞凋亡的作用

正常糖组

【参考文献】