STAT3在IL-6诱导人腹膜间皮细胞上皮间质转分化中的作用研究

发布时间：2020-08-01 07:46

【摘要】：背景研究发现随着终末期肾脏病(End-stage renal disease,ESRD)腹膜透析(Peritoneal dialysis,PD)患者PD时间的延长,腹膜的形态和功能将发生改变,导致腹膜纤维化(Peritoneal fibrosis,PF),最终导致超滤衰竭(Ultrafiltration Failure,UFF)。目前UFF已经成为PD患者被迫退出PD的主要原因,因此探讨并寻找减轻腹膜纤维化、延缓腹膜透析UFF发生的方法显得尤为重要。目的本研究通过白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)刺激人腹膜间皮细胞(Human peritoneal mesothelial cells,HPMCs),诱导HPMCs上皮-间质转化(Epithelial mesenchymal transition,EMT),并探讨信号传导与转录激活基因3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)对上皮-间质转化的作用。方法体外培养人腹膜间皮细胞,用不同浓度IL-6刺激HPMCs不同时间,分组:(1)以50μg/L IL-6刺激HPMCs不同时间,按刺激时间0h、24h、48h、72 h分组;(2)不同浓度IL-6刺激HPMCs 24小时,按IL-6浓度0μg/L、50μg/L、100μg/L分组;应用慢病毒介导RNA干扰技术培养并建立稳定沉默STAT3基因的HPMCs细胞株,并将其分组:(1)空白对照组;(2)IL-6组;(3)空载体组;(4)空载体+IL-6组;(5)慢病毒感染组;(6)慢病毒感染+IL-6组,其中所有加入IL-6组均以50μg/L IL-6刺激HPMCs 24小时。应用细胞免疫荧光观察技术检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达和分布。应用蛋白印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR法(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测JAK2(Janus kinase 2,JAK2)/STAT3信号转导通路及EMT相关蛋白和基因表达。采用SPSS22.0软件对实验中所得数据进行统计学分析。结果与对照组相比,随着IL-6刺激HPMCs时间延长及IL-6的浓度增加,E-cadherin蛋白和m RNA(Messenger ribonucleicacid,mRNA)表达均下降(均P0.05),α-SMA、VEGF(Vascular endothelial growth factor)蛋白和m RNA表达均升高(均P0.05),通路蛋白p-JAK2/JAK2比值和p-STAT3/STAT3比值均升高(P0.05)。应用慢病毒沉默STAT3基因后,与空载体+IL-6组相比,慢病毒感染+IL-6组α-SMA、VEGF蛋白表达均下降(均P0.05),E-cadherin蛋白表达上升(P0.05)。细胞免疫荧光结果提示,对照组间皮细胞之间可见E-cadherin蛋白的表达,胞质内可少量表达α-SMA蛋白;与对照组相比,50μg/L IL-6刺激HPMCs 24小时后,细胞膜上E-cadherin蛋白表达明显减少,间皮细胞胞质内α-SMA蛋白表达增加。结论IL-6可以活化JAK2/STAT3信号通路参与人腹膜间皮细胞EMT过程,并可以刺激HPMC分泌VEGF。应用慢病毒沉默STAT3基因后,人腹膜间皮细胞EMT过程被抑制。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R692
【图文】：

绿色荧光代表检测的目的蛋白，蓝色荧光代表 HPMC 的细胞L-6 对 HPMC 中 α-SMA、E-cadherin 表达的影响（细胞免疫荧6 对 JAK2/STAT3 信号通路的影响tern 蛋白印记法结果显示，随着 IL-6 刺激人腹膜间皮细胞时间的增加，通路蛋白 p-JAK2 与 JAK2 的比值和 p-STAT3 与 STA与对照比较均 P＜0.05），证明通路蛋白磷酸化水平升高，见

a注：A：对照组；B、C：50、100μg/L IL-6 刺激人腹膜间皮细胞 24 h；与比较，aP＜0.05；n=3图 3.1 不同剂量 IL-6 刺激对人腹膜间皮细胞 JAK2/STAT3 信号通路的影（Western 印迹）aaaa

VEGF 的蛋白和 mRNA 表达升高（与对照比较均 P＜0.05），见图4.1，图 4.2。注：A：Western 印迹；B：实时荧光定量 PCR ；A：对照组；B、C：50、100μg/LIL-6 刺激人腹膜间皮细胞 24 h；与对照组比较，aP＜0.05；n=3图 4.1 不同剂量 IL-6 刺激 24 h 人腹膜间皮细胞 EMT 相关蛋白的表达aaaaaaaaaaaaAB

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本文编号：2777175