控制代谢对糖尿病勃起功能障碍的影响及津力达保护高糖诱导的大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞功能的研究

发布时间：2020-08-15 18:02

【摘要】：第一部分控制代谢对糖尿病性勃起功能障碍影响的研究目的:观察男性糖尿病勃起功能障碍患者控制代谢对勃起功能的影响。方法:选取我院2015~2018年新诊断的男性2型糖尿病(按美国糖尿病学会2014年糖尿病诊断及分类标准经标准OGTT试验诊断)合并勃起功能障碍(Erectile dysfunction,ED)(IIEF-521分)患者80例(排除心源性ED),给予饮食运动治疗基础上,强化血糖控制,降脂等改善代谢治疗6个月,使其达到控制目标:FBG≤6.0 mmol/L,PBG≤8.0 mmol/L,Hb A1c≤6.5%,CHO4.6mmol/L,TG1.7mmol/L,研究前后给予国际勃起功能指数(问卷)(IIEF-5)评估ED。结果:治疗后有10例患者出现症状明显好转,且IIEF-5问卷调查得分21。其余患者治疗后症状没有明显好转,治疗前、后IIEF-5问卷调查得分由(13±1.6)改变为(16±0.8)(P0.05)。结论:初诊的男性糖尿病勃起功能障碍患者单纯严格的控制血糖并不能明显改善糖尿病性勃起功能障碍。第二部分津力达对高糖诱导的大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化及凋亡的影响及机制目的:探讨津力达颗粒对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(corpus cavernosum smooth muscle cells,CCSMCs)表型转化及凋亡的影响及机制。方法:1.将原代SD大鼠CCSMCs进行传代培养,将所有细胞与5.5mmol/L葡萄糖一起孵育24h后按照更换的培养基不同分为7组:(1)正糖组(NG):生理浓度葡萄糖5.5 mmol/L;(2)高糖组(HG):葡萄糖25 mmol/L;(3)高渗组(HC):甘露醇25mmol/L(此组渗透压与高糖组相同,用于鉴别高糖诱导的损伤是源于高糖还是源于高渗透压);(4)高糖+PD98059组(HG+PD),葡萄糖25 mmol/L+50μmol/L PD98059,PD98059提前HG 30 min加入;(5)高糖+低浓度津力达组(HG+LJLD):葡萄糖25 mmol/L+津力达50mg/L,加入葡萄糖25 mmol/L 1小时之后进行药物的处理;(6)高糖+中浓度津力达组(HG+MJLD):葡萄糖25 mmol/L+津力达150mg/L,加药顺序同前;(7)高糖+高浓度津力达组(HG+HJLD):葡萄糖25 mmol/L+津力达300mg/L,加药顺序同前。各组细胞处理完后分别于0、24、48h在高倍镜下观察细胞形态变化,48h收集细胞,Western blot检测各组细胞平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、碱性调宁蛋白(calponin1)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达;信号通路蛋白ERK1/2、p-ERK1/2,凋亡蛋白caspase-3、bcl-2的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:1.CCSMCs成长和形态部分单层,排列开始呈现方向性,多平行排列,细胞密度高时排列成束状或旋涡状,部分区域上下起伏,呈典型“峰-谷”样平滑肌细胞特征(如图1-1)。CCSMCs在传代培养中,开始呈长梭形和星形,随培养时间延长和细胞密集程度增大,当细胞生长融合时,部分区域多层重叠。NG组,随着时间延长,CCSMs生长情况好,成活率高;细胞多呈束状或旋涡状,排列较具方向性,细胞多单层生长。HG组,随着干预时间延长,CCSMCs数量减少,CCSMCs形态从开始细长的束状或旋涡状形到更宽更凌乱的形状。HG+JLD各组的CCSMCs细胞数量未明显减少,细胞形态没有明显变化。2.表型蛋白的变化与NG组比较,HG组α-SMA、calponin1表达均显著减少(P0.05);OPN表达显著增多(P0.05)。高糖加入津力达干预后,与HG组比较,津力达各组ɑ-SMA、calponin1表达增多;OPN表达显著减少(P0.05),津力达浓度越大,逆转越明显。HC组无上述改变。3.凋亡蛋白及凋亡率的变化与NG组比较,HG组caspase-3蛋白表达显著上升(P0.01);bcl-2蛋白表达显著下降(P0.01),与HG组比较,津力达各组caspase-3蛋白表达显著下降(P0.05),bcl-2蛋白表达显著上升(P0.01)。与NG组比较,流式测得HG组CCSMCs凋亡率显著升高(P0.01);津力达各组CCSMCs凋亡率较HG组明显减少(P0.05)。4.通路蛋白ERK1/2变化与NG组比较,HG组p-ERK1/2蛋白表达显著上调(P0.01);加入ERK抑制剂PD98059后p-ERK1/2表达减低(P0.05),ɑ-SMA、calponin1表达回升;OPN表达减少;津力达干预后,各组p-ERK1/2蛋白表达较HG组下降(P0.05)。结论:高糖可能通过上调ERK1/2的磷酸化进而诱导CCSMCs从收缩型向合成型转化并诱导CCSMCs凋亡;津力达可能通过抑制ERK1/2的磷酸化,改善高糖诱导的上述变化。
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.2;R698

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本文编号：2794459