组织因子途径抑制物-2抑制人前列腺癌细胞上皮间质转化的研究

发布时间：2020-08-21 16:34

【摘要】：目的：1、观察组织因子途径抑制物-2 (tissue factor pathway inhibitor-2, TFPI-2)对人前列腺癌细胞侵袭能力和迁移能力影响；2、通过形态学水平及分子水平,探讨TFPI-2对人前列腺癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法：1、传代培养人前列腺癌细胞株PC3M,选取生长稳定的3～8代细胞进行实验；2、将选取的细胞随机分为3组,分别转染TFPI-2基因真核表达载体(转染组)、空载体(转染空载体组)及不转染(未转染组)；3、细胞划痕实验检测3组细胞的迁移能力；4、细胞侵袭小室实验检测它们的侵袭能力；5、用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)处理细胞,倒置相差显微镜下观察3组细胞形态；6、Western Blot法分别检测经TGF-β1处理后的3组细胞EMT标志物——E钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和snail蛋白在蛋白水平上的表达量,统计分析相关数据；7、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测3组细胞EMT标志物在mRNA水平上的表达量并统计分析相关数据。结果：1、细胞划痕实验：转染组、转染空载体组、未转染组迁移率分别为(29.65±8.33)%,(55.45±10.07)%,(54.06±11.29)%,经方差分析,3组迁移率不全相等,转染组分别与转染空载体组、未转染组比较差异有统计学意义(P0.05),但转染空载体组、未转染组之间差异无统计学意义。说明PC3M细胞转染TFPI-2后迁移能力明显降低。2、细胞侵袭小室实验：转染组、转染空载体组、未转染组侵袭细胞数分别为(90.3±24.3),(227.1±40.5),(232.7±42.7),经方差分析,3组侵袭细胞数不全相等,转染组分别与转染空载体组、未转染组比较差异有统计学意义(P0.05),但转染空载体组、未转染组之间差异无统计学意义。说明PC3M细胞转染TFPI-2后侵袭能力明显受到抑制。3、倒置相差显微镜下观察：转染组细胞大多呈多角形“铺路石样”,细胞之间连接较紧密；转染空载体组、未转染组细胞大多呈梭形“间叶细胞样”,细胞之间无明显连接,呈散在生长。4、Western Blot:以未转染组作为对照组,转染组E-cadherin表达较多,为对照组的(1.819±0.105)倍,vimentin和snail蛋白表达较少,分别为对照组的(0.538±0.034),(0.458±0.019)倍,与转染空载体组、未转染组比较,差异有统计学意义(P0.05),但转染空载体组、未转染组之间比较,各蛋白表达量差异无统计学意义。5、RT-PCR:以未转染组作为对照组,转染组E-cadherin mRNA表达较多,为对照组的(2.104±0.068)倍,vimentin和snail蛋白的mRNA表达较少,分别为对照组的(0.515±0.034),(0.437±0.017)倍,与转染空载体组、未转染组比较,差异有统计学意义(P0.05),但转染空载体组、未转染组之间比较,各mRNA表达量差异无统计学意义。结论TFPI-2可以抑制人前列腺癌细胞的EMT,这是其抑制前列腺癌细胞侵袭与转移的可能机制之一,为基因及生物靶向治疗前列腺癌提供新的思路和方向。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25

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本文编号：2799609