丙戊酸抑制前列腺癌细胞侵袭力与SMAD4相关性的研究

发布时间：2020-08-22 05:25

【摘要】：研究背景近年来,我国前列腺癌的发病率明显呈现逐年上升的趋势。随着前列腺癌的进展,有相当一部分患者出现了骨骼、肺部等转移,使预后变得较差。针对前列腺癌的转移行为的研究已经成为近年来的关注热点之一。研究表明,上皮细胞间质转化(EMT)是前列腺癌的侵袭、转移行为的关键启动步骤,而TGF-β则是公认的诱导EMT发生的主要因素。研究表明,SMAD4蛋白在介导TGF-β调控EMT的过程中发挥着重要的作用；然而,也有观点认为SMAD4在前列腺癌的侵袭、转移过程中起着抑制性作用。关于SMAD4在前列腺癌进展中的作用,目前尚无定论。结合当前的研究现状,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)能够在多方面抑制前列腺癌的进展,包括增殖、自嗜、血管生成以及EMT等,是一类强有力的前列腺癌抑制剂。目前,关于HDACi类药物抑制前列腺癌EMT的作用是否与调控SMAD4的表达水平有关,尚无相关文献报道。目的研究HDACi类药物丙戊酸(VPA)对前列腺癌细胞株DU145和PC3的侵袭能力的影响,以及同时对SMAD4表达水平的影响,探讨SMAD4在VPA抑制前列腺癌细胞侵袭过程中发挥的作用。方法在所有的实验分组中,VPA的处理时间均为48h, PC3和DU145细胞均置于5%CO2、37°C下的恒温孵育箱内培养。 1. Transwell实验：将前列腺癌细胞株PC3和DU145各自分为对照组、VPA2.0mM/L实验组和VPA5.0mM/L实验组,将PC3和DU145细胞分别经过相应浓度的VPA处理48h后,接种于预铺胶的Transwell小室的上室中,在给予相同浓度的胎牛血清刺激的条件下培养48h后,取出小室并固定、染色,然后于镜下随机选取5-10个视野统计计数,观察VPA处理后PC3和DU145细胞的侵袭能力的改变； 2.免疫荧光检测：将前列腺癌细胞株PC3和DU145各自分为对照组和VPA5.0mM/L实验组,将PC3和DU145细胞接种于盖玻片上,并置于6孔板内培养,分别经过相应浓度的VPA处理48h后,经过固定、打孔、抗体孵育、洗脱等步骤后,置于荧光显微镜下观察PC3和DU145细胞中SMAD4的定位部位以及表达水平； 3. Western blot检测：将前列腺癌细胞株PC3和DU145各自分为对照组、VPA2.0mM/L实验组和VPA5.0mM/L实验组,将PC3和DU145细胞接种于6孔板内培养,分别经过相应浓度的VPA处理48h后,应用BCA试剂盒法提取SMAD4蛋白、p-AKT蛋白并测定蛋白浓度,经过电泳、转膜、抗体孵育等步骤后,应用ECL发光系统检测PC3和DU145细胞各组中SMAD4蛋白以及p-AKT蛋白的表达水平。结果 1.[answell实验：VPA能够明显地抑制PC3和Du145细胞的侵袭能力,且抑制水平与VPA的浓度成正相关(p0.01)； 2.免疫荧光实验：荧光标记后的SMAD4主要表达于PC3和Du145细胞的胞质内,细胞核内荧光强度较微弱,这与SMAD4的功能学相符合；VPA处理组的SMAD4蛋白荧光强度明显弱于对照组的荧光强度； 3.Western blot实验：VPA抑制了p-AKT的表达水平(剂量依赖,p0.05),这与本课题组前期发表的研究结果一致,证明VPA在本实验中确实发挥了作用；VPA同时也明显地抑制了Du145(p0.05)和PC3(p0.01)细胞内SAMD4蛋白的表达水平,并且抑制程度与VPA浓度成正比。结论 VPA能够明显地抑制前列腺癌细胞PC3和DU145的侵袭能力,同时也抑制了SMAD4蛋白水平的表达。这提示我们,VPA能够抑制前列腺癌细胞的侵袭力,这一过程可能与阻断了SMAD4参与的TGF-β诱导EMT的过程有关,进一步阐明了VPA抑制前列腺癌细胞侵袭能力的机制。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.25

【参考文献】