miR-34a对前列腺癌细胞化疗敏感性影响的实验研究

发布时间：2020-08-26 17:31

【摘要】：目的:探讨miR-34a对前列腺癌细胞株的化疗敏感性的影响方法:第一部分,MTT检测miR-34a、5-Aza对两株PCa细胞增殖的影响:1.mimicNC、miR-34a mimic转染与5-Aza去甲基化分别处理两株PCa细胞PC-3、DU145 48h;2.MTT检测各组PCa细胞在波长为570nm的吸光值(时间0/24/48/72h)分组:PC-3:Con组、pre-Con组、pre-miR-34a组、5-Aza组;DU145:Con组、pre-Con组、pre-miR-34a组、5-Aza组。第二部分,MTT检测miR-34a、5-Aza对两株PCa细胞耐药性的影响:1.mimicNC、miR-34a mimic转染与5-Aza去甲基化分别处理两株PCa细胞PC-3、DU145 48h;2.同时分别选择不同浓度的Dox和Topo作用于各组PCa细胞48h(Dox浓度:0、0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0umol/L;Topo浓度:0、0.0195、0.078、0.3125、1.25、5.0mg/L);3.MTT检测各组PCa细胞在波长为570nm的吸光值,并分别计算Dox和Topo在各组PCa细胞中的IC50值。分组(两种化疗药物):Con组、pre-con组、pre-miR-34a组、5-Aza组。第三部分,流式细胞术检测Dox、Topo、5-Aza与miR-34a对两株PCa细胞凋亡的影响:1.miR-34a mimic转染与5-Aza去甲基化分别处理两株PCa细胞PC-3、DU145细胞48h;2.流式细胞术检测各组PCa细胞的凋亡率;分组(两株PCa细胞):Con组、Dox组、Topo组、pre-miR-34a组、pre-miR-34a+Dox组、pre-miR-34a+Topo组、5-Aza组、5-Aza+Dox组、5-Aza+Topo组。结果:mimicNC、miR-34a mimic转染和5-Aza去甲基化分别处理PCa细胞PC-3、DU145后,MTT检测结果显示:miR-34a mimic转染或5-Aza去甲基化处理组的两株PCa细胞在波长为570nm的吸光值低于mimicNC处理组和空白处理组;表明miR-34a mimics转染或5-Aza去甲基化诱导miR-34a表达上调能抑制PCa细胞PC3、DU145的增殖。添加不同浓度的Dox、Topo药物处理后,MTT测定Dox、Topo在各组PCa细胞中的IC50值显示:miR-34a mimic转染组或5-Aza去甲基化组处理后的两株PCa细胞,Dox、Topo的IC50值比mimicNC处理组和空白处理组低;表明miR-34a mimics转染或5-Aza去甲基化诱导miR-34a表达上调能够降低Dox、Topo对两株PCa细胞的IC50值,提示miR-34a mimics转染或5-Aza去甲基化诱导miR-34a上调能提高Dox、Topo对PCa细胞PC3、DU145的化疗敏感性。进一步通过流式细胞术检测结果显示:Dox组、Topo组、pre-miR-34a组、5-Aza组与Con组相比,两株PCa细胞的凋亡率显著增加;pre-miR-34a+Dox(Topo)组与单独Dox组、Topo组、pre-miR-34a组相比,两株PCa细胞的凋亡率增加;同样,5-Aza+Dox(Topo)组与单独Dox组、Topo组、5-Aza组相比,两株PCa细胞的凋亡率增加;这表明,miR-34a mimics转染或5-Aza去甲基化诱导miR-34a上调能促进PCa细胞PC-3、DU145的凋亡,增强Dox、Topo对PCa细胞PC-3、DU145的化疗敏感性。结论:1.miR-34a可能抑制PCa细胞的增殖。2.miR-34a可能促进PCa细胞的凋亡。3.miR-34a可能增加PCa细胞的化疗敏感性。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.25
【图文】：

图 3.1 PC-3 细胞 MTT 生长曲线图与 Con 组比较有统计学差异（P<0.05），▲与 pre-Con 组比较有统计学差异（P<0.05）表 3.2 DU145 细胞 MTT 结果数据（ x±s，n=5）Con 组 pre-Con 组 pre-miR-34a 组 5-Aza 组0h 0.458±0.016 0.436±0.011 0.427±0.027 0.438±0.04024h 0.748±0.034 0.730±0.033 0.668±0.021＊▲0.715±0.024＊48h 1.250±0.033 1.210±0.043 1.019±0.022＊▲1.169±0.043＊72h 1.749±0.034 1.729±0.059 1.248±0.029＊▲1.552±0.036＊

图 3.2 DU145 细胞 MTT 生长曲线图与 Con 组比较有统计学差异（P<0.05），▲与 pre-Con 组比较有统计学差异（P<0.05）.2 miR-34a、5-Aza 对两株 PCa 细胞耐药性的影响本实验设置 Con 组；pre-Con 组；5-Aza 组；pre-miR-34a 组，不同浓度的两种疗药物 Dox、Topo 处理各组 PCa 细胞，通过 MTT 法测定各组 PCa 细胞在波长为 57处的 OD 值，计算 Dox、Topo 在各组 PCa 细胞中的 IC50 值，所得数据如表（表 表 3.4）所示，所得 Dox 药物 IC50 值直方图和 Topo 药物 IC50 值直方图，如图所示（3.3、图 3.4），两种化疗药物 Dox、Topo 的 IC50 值在 pre-miR-34a 处理组中低于组和 pre-Con 组，组间比较有统计学意义（P＜0.05）；同样，两种化疗药物 Dox、T的 IC50 值在 5-Aza 处理组中也低于 Con 组和 pre-Con 组，组间比较有统计学意义

南华大学硕士学位论文表 3.3 PC-3、DU145 细胞对 Dox 药物耐药性 MTT 结果数据（ x±s，n=5）Con 组 pre-Con 组 pre-miR-34a 组 5-Aza 组DU145 0.566±0.024 0.542±0.023 0.305±0.018＊▲0.432±0.017＊▲PC-3 0.666±0.026 0.617±0.026 0.389±0.015＊▲0.452±0.017＊▲＊与 Con 组比较有统计学差异（P<0.05），▲与 pre-Con 组比较有统计学差异（P<0.05）

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本文编号：2805475