白藜芦醇对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制研究

发布时间：2020-09-10 07:55

　　目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病的严重并发症之一,其病理变化呈慢性进行性,最终导致终末期肾衰竭,是糖尿病患者主要的死亡原因,目前对于DN的治疗仍然缺乏很有效的手段。糖尿病肾病的特点是肾脏细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的过度积累、肾小管间质增厚和肾血管的透明化。氧化应激产生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)在肾小球和肾小管间质ECM的合成和降解中发挥了重要作用。氧化应激在糖尿病肾病发病过程中起重要作用。转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2relatedfactor2,Nrf2)是抗氧化反应元件的激活因子,是重要的内源性抗氧化应激通路,在糖尿病肾病的发生发展过程中的作用受到广泛关注。白藜芦醇是一种天然的多酚醇类化合物,广泛存在于葡萄籽、虎杖、花生等多种植物中,具有抗氧化、抗炎及抗衰老等多种药理活性。白藜芦醇能明显降低DN大鼠的白蛋白尿水平和提高肌酐清除率,从而降低DN大鼠的肾脏高灌注和高滤过;白藜芦醇能有效地降低DN大鼠肾脏内Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、结缔组织生长因子、纤溶酶原激活物抑制剂-1、转化生长因子-β1等的表达水平,从而减轻糖尿病大鼠的肾脏纤维化程度。我们的实验设计是用高糖诱导人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)凋亡,探讨白藜芦醇抑制高糖诱导HK-2凋亡的可能机制。方法:采用MTT法检测HK-2细胞活力;使用caspase-3活性与Hoechst染色法检测HK-2细胞凋亡;运用DCFH-DA法检测HK-2细胞内的活性氧水平;通过Real-time PCR检测细胞内Nrf2 mRNA表达;采用Western Blot法检测细胞内Nrf2蛋白表达。结果:30mM葡萄糖能显著降低HK-2细胞活力,并呈时间依赖性,而30 mM渗透压对照组对细胞没有影响。30mM葡萄糖可诱导HK-2细胞凋亡,Hoechst染色法显示凋亡细胞增多,且caspase-3活性增加。30mM葡萄糖能升高细胞活性氧水平。1μM和10μM白藜芦醇均可以增加HK-2细胞活力,其中10μM白藜芦醇能使高糖诱导的HK-2细胞的凋亡率显著下降,减少Hoechst染色阳性细胞,降低caspase-3活性。10μM白藜芦醇能使高糖诱导的HK-2细胞的活性氧水平下降。高糖能下调Nrf2 mRNA和蛋白表达,10μM白藜芦醇能上调高糖抑制的Nrf2 mRNA和蛋白表达。结论:白藜芦醇对高糖诱导的HK-2凋亡的保护机制可能与抑制活性氧的生成和上调Nrf-2表达有关。
【学位单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R587.2;R692.9
【部分图文】：

白藜芦醇,凋亡,甘露醇,葡萄糖

图 4.4 白藜芦醇对高糖诱导 HK-2 凋亡的影响（200×）（n=3）A: 空白对照（5.5mM）；B：葡萄糖（30mM） 24h；C:白藜芦醇(10μM)1h+ 葡（30mM）24h；D: 甘露醇（30mM）24h

白藜芦醇,甘露醇,凋亡,葡萄糖

白藜芦醇,蛋白表达,葡萄糖

白藜芦醇对高糖处理HK-2Nrf2蛋白表达的影响（n=3）

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