甘氨酸脱羧酶（GLDC）通过增强Warburg效应介导前列腺癌转移的分子机制

发布时间：2020-09-12 14:22

　　目的前列腺癌转移是前列腺癌难治和患者死亡的主要原因之一,早期准确预测和阻断转移信号通路是目前前列腺癌研究的难点和热点,极具临床意义和价值。肿瘤转移促进因素与抑制因素的失衡是肿瘤转移的主要原因,肿瘤细胞特有能量代谢模式(Warburg效应)的开启及所带来的一列效应(细胞代谢、转移促进基因的激活等)在打破这种平衡状态中发挥重要作用,其中甘氨酸脱羧酶(GLDC)与Warburg效应有着密切的相关性,但其具体机制有待阐明。因此,我们将探究GLDC与Warburg效应的关系及其介导前列腺癌转移的分子机制。方法1.TCGA数据库分析GLDC在正常前列腺组织和前列腺癌组织中的表达水平。Western Blot实验验证GLDC在前列腺癌细胞和组织标本中的表达水平。2.GLDC差异性表达后,细胞划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验,检测前列腺癌细胞的平行迁移、垂直迁移及侵袭能力。3.GLDC差异性表达后,代谢组芯片分析前列腺癌细胞的代谢水平变化,葡萄糖摄取实验、乳酸生成实验及乳酸脱氢酶实验检测前列腺癌细胞葡萄糖摄取量、乳酸生成量及乳酸脱氢酶活性。4.将野生型GLDC过表达质粒及点突变酶失活GLDC质粒分别转染22RV1细胞后,细胞划痕实验、Transwell迁移及侵袭实验,检测其平行迁移、垂直迁移及侵袭能力。葡萄糖摄取实验、乳酸生成实验及乳酸脱氢酶实验,检测其葡萄糖摄取量、乳酸生成量及乳酸脱氢酶活性。5.GLDC在前列腺癌中的临床意义:单因素与多因素分析以及生存分析。结果1.GLDC在正常前列腺组织中的表达显著低于前列腺癌组织。GLDC在局限性前列腺癌细胞(22RV1)、转移性前列腺癌细胞(DU145、LnCaP)中的表达量依次增高。2.沉默或过表达GLDC可以显著降低或提高前列腺癌细胞的平行迁移、垂直迁移及侵袭能力。3.代谢组芯片分析,发现GLDC差异性表达可显著改变前列腺癌细胞的代谢水平。沉默或过表达GLDC可显著降低或提高前列腺癌细胞葡萄糖摄取量、乳酸生成量及乳酸脱氢酶活性。4.22RV1细胞分别转染野生型GLDC过表达质粒及点突变酶失活GLDC质粒后,均成功过表达了GLDC。与GLDC点突变酶失活的22RV1细胞相比,野生型GLDC过表达的22RV1细胞的平行迁移、垂直迁移及侵袭能力均显著提高;葡萄糖摄取量、乳酸生成量及乳酸脱氢酶活性亦均明显增加。5.单因素与多因素分析结果显示,GLDC高表达是前列腺癌患者临床进展的独立危险因素。无进展生存率分析结果表明,GLDC高表达前列腺癌患者的无进展生存率明显下降。结论1.GLDC高表达于前列腺癌组织和转移性前列腺癌细胞。2.GLDC可促进前列腺癌的侵袭转移。3.GLDC通过增强Warburg效应介导前列腺癌的侵袭转移。4.GLDC酶活性是前列腺癌细胞侵袭转移功能所必需的。5.GLDC的高表达与前列腺癌的临床进展预后有着密切联系。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R737.25
【部分图文】：

前列腺癌,数据库分析,配对分析

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前列腺癌,癌组织,正常组织,配对分析

转染,小室,细胞数,细胞

硕士学位论文逡逑Ｃ）结果显示，转染ｓｉＲＮＡ４８ｈ后，ｓｉ－ＧＬＤＣ组的ＤＵ１４５细胞划痕面积愈合百逡逑分比与Ｃｏｎｔｒｏ丨组及ｓｉ－ＮＣ组相比均明显减少（＊＊＊Ｐ＜０．０１邋）。Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移（图逡逑２－ＩＤ，邋Ｆ）及侵袭实验（图２－１Ｅ，Ｇ）结果均显示，转染ｓｉＲＮＡ４８ｈ后，ｓｉ－ＧＬＤＣ逡逑组的ＤＵ１４５细胞从上室穿过小室膜至下室的细胞数较Ｃｏｎｔｒｏｌ组及ｓｉ－ＮＣ组明逡逑显减少。逡逑Ａ逦Ｃｏｎｔｒｏｌ逦ｓｉ－ＮＣ逦ｓｉ－ＧＬＤＣ逡逑

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