血管钙化相关调节因子在尿酸性肾病发病机制中的作用研究

发布时间：2020-09-15 14:48

　　目的:利用尿酸性肾病大鼠动物模型,研究尿酸与肾脏钙化关系及Cbfα1、TNF-α、OPN、OPG对钙化的调节作用。观察钙离子拮抗剂对尿酸性肾病肾组织钙化和钙化调节因子的影响,探讨尿酸性肾病肾组织钙化的发生机制。方法:1.将45只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和氨氯地平处理组共3组,用10%酵母饲料喂养联合腺嘌呤(100mg/kg.d)灌胃造模,氨氯地平处理组在造模的同时予氨氯地平灌胃干预。第4周造模成功,处死大鼠。2.留24h尿液,并取大鼠眼内眦静脉血液5ml,分离血清后-20°C保存备用,备测各项生化指标和24h尿微量白蛋白定量。3.第4周时处死大鼠,统一摘取右肾,一半肾组织部分用于行邻甲酚酞络合酮比色法测定大鼠肾组织钙含量;部分肾组织制成蜡块,留做HE染色病理切片和用免疫组化法检测肾内OPN、OPG、Cbfα1和TNF-α的表达。4.取另一半部分肾组织用Western Blot(WB)法检测Cbfα1、TNF-α、OPN和OPG的蛋白表达水平,剩余部分应用逆转录多聚酶链反应龴RT-PCR㖞检测肾内OPN、OPG、Cbfα1和TNF-αm RNA的表达。结果:1.喂养10%的酵母饲料联合腺嘌呤100mg/kg.d灌胃造模4周,大鼠的血肌酐、尿素氮和血清尿酸及24h尿微量白蛋白水平,在模型组和处理组中较正常对照组明显升高(p0.05),模型组和氨氯地平处理组相比无统计学意义(p0.05)。模型组大鼠的肾小管扩张,小管上皮细胞损伤,小管间质存在炎细胞浸润。2.尿酸性肾病模型组和氨氯地平处理组大鼠肾组织的钙含量显著高于正常对照组(P0.01),氨氯地平处理组大鼠肾组织钙含量较尿酸性肾病模型组明显减少(P0.01)。3.免疫组织化学结果显示3组大鼠肾组织内促血管钙化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑钙化因子(OPN、OPG)均表达在肾小管,尿酸性肾病模型组大鼠肾组织内促血管钙化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑钙化因子(OPN、OPG)阳性表达强度较正常对照组明显增强(P0.01)。氨氯地平处理组大鼠肾组织促血管钙化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑钙化因子(OPN、OPG)阳性表达强度较模型组显著减少(P0.01),仍显著高于正常对照组(P0.01)。4.WB法检测结果显示模型组大鼠肾组织内促血管钙化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑钙化因子(OPN、OPG)的蛋白表达水平较正常对照组大鼠肾组织内的表达明显升高(P0.01)。氨氯地平处理组大鼠肾组织促血管钙化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑钙化因子(OPN、OPG)蛋白表达水平较尿酸性肾病模型组显著减少(P0.01),与正常对照组相比无统计学意义(P0.05)。5.Real-time RT-PCR法检测结果显示尿酸性肾病模型组大鼠肾组织内促血管钙化因子(Cbfα1、TNF-α)和抑钙化因子(OPN、OPG)基因表达水平较正常对照组大鼠肾组织内表达明显增强(P0.01)。氨氯地平处理组大鼠肾组织促血管钙化因子(Cbfα1、TNF-α)基因表达较尿酸性肾病模型组明显减少(分别为P0.01,P0.05),与正常对照组相比无统计学意义(P0.05)。氨氯地平处理组大鼠抑钙化因子(OPN、OPG)基因在肾组织的表达明显低于较模型组(P0.01),但仍明显高于正常对照组(P0.01)。结论:1.高尿酸可显著增加尿酸性肾病大鼠肾组织内促钙化因子Cbfα1和TNF-α及抑钙化因子OPN、OPG的蛋白和基因表达水平,导致大鼠肾组织钙含量明显增加。2.氨氯地平能下调尿酸性肾病肾组织内促钙化因子Cbfα1和TNF-α及抑钙化因子OPN、OPG的蛋白和基因表达水平,从而减少大鼠肾组织钙含量。3.促钙化因子(TNF-a和Cbfa1)和抑钙化因子(OPN、OPG)调节失衡可能参与了尿酸性肾病的发病。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R692
【部分图文】：

组织病理

血管钙化相关调节因子在尿酸性肾病发病机制中的作用研究博士学位4.1.3 大鼠肾脏病理正常对照组：正常大鼠的肾脏皮髓质分界比较清楚，肾小球无损伤增生性病变；肾小管集合管结构正常，无扩张，腔内无管型，无间质灶瘀血；肾内小动脉结构正常。尿酸性肾病模型组：表现为肾小管扩张，小管上皮细胞空泡变性，见明显尿酸盐晶体，小管间质可见炎症细胞（中性粒细胞和单核细胞）润，表明尿酸性肾病模型已制备成功。如图 4.1 所示：

组织钙,含量比较,动物模型

图 4.2 三组大鼠肾组织钙含量比较Figure 4.2 Comparison of Calcium Content in renal tissue of ra肾病动物模型研究和评价的社会经济发展后人民群众生活方式跟着发生了变风和尿酸性肾病的群体在我国已急剧增加，在全球趋势。当下尿酸性肾病发病机制及其有效的治疗预而研究需要建立成功的动物模型，迄今为止，我们立与临床相似的高尿酸、尿酸肾病动物模型。动物

免疫组化,氨氯地平,处理组,肾间质

正常对照组大鼠肾小管少量表达 OPG，未见肾小球、肾血管和肾间质表达。模型组大鼠肾小管显著表达 OPG，肾内小动脉血管、肾小球和肾间质同样未见表达。与正常对照组大鼠肾组织内 OPG 表达强度（30.13±3.50）相比，尿酸性肾病模型组表达（51.78±10.13）和氨氯地平处理组表达（37.70±4.33）显著增加（P<0.01），氨氯地平处理组大鼠肾组织 OPG 的表达强度较模型组显著减少（P<0.01）。表 4.1 三组大鼠肾组织中 OPG 表达的比较（ x±s）Table4.1 Comparison of OPG expression in renal tissue of rat（ x±s）**P<0.01vs 正常对照组，＃＃P<0.01vs 模型组指标正常对照组模型组处理组(n=9) (n=9) (n=14) F POPG 的表达 30.13±3.50 51.78±10.13**37.70±4.33**＃＃27.34 0.000

【参考文献】