生精障碍男性Y染色体AZFc区遗传变异的检测及其通过辅助生殖治疗后妊娠结局的回顾性分析

发布时间：2020-10-09 05:07

　　 全球约有10%-15%的育龄夫妇被不孕不育问题困扰,其中男性因素约占30%-50%。遗传缺陷所致的原发性生精障碍是男性不育的重要原因。Y染色体无精子症因子(Azoospermia Factor,AZF)缺失,即通常所说的Y染色体微缺失,是导致男性原发性生精障碍的第二个常见的遗传因素,仅次于Klinefelter's综合征。目前普遍认为AZF发生缺失的区域主要分为AZFa、AZFb和AZFc三个区。其中AZFc区缺失的发生率在所有Y染色体微缺失中最高。AZFc区域存在大量的多拷贝序列,其碱基相似度高,容易通过非等位基因同源重组的形式,造成染色体的重排,这对如何进行此区域的精确检测提出了挑战。迄今为止,关于AZFc区遗传结构变异研究的较为透彻的是完全缺失(b2/b4)型,携带这一变异的男性一般表现为严重的精子发生障碍。而对于AZFc区部分缺失gr/gr、b2/b3、b1/b3亚型的研究则相对较少,并且这些缺失类型对生精障碍的影响也存在争议。另外,AZFc区其它形式的拷贝数变异(copy-number variants,CNV)和复杂重排的发生率及其在精子发生中的贡献尚不明确。为了鉴定AZFc区部分缺失的常见类型,我们建立了两个多重PCR体系,分别对生精障碍组和正常对照组外周血DNA的5个序列标签位点(sY1189、sY1191、sY1192、sY1197、sY1291)进行检测,结果发现575例生精障碍的患者中有87例存在AZFc部分缺失,发生率为15.1%,其中gr/gr缺失生精障碍组发生率最高(7.1%)。114例正常对照中检测出AZFc部分缺失10例,发生率为8.9%,其中b2/b3在正常人群中发生率最高(4.4%)。为了进一步探讨AZFc区部分缺失与生精障碍的关系,我们对生精障碍病例组和正常对照组的缺失发生率进行两两比较,发现病例组gr/gr缺失发生率明显高于正常对照组;而且,严重少精症和少精症两个生精障碍亚组的gr/gr缺失发生率也均明显高于正常对照组;b2/b3缺失在病例组的发生率与正常对照组无明显差异。这些结果提示,gr/gr缺失可能是男性生精障碍的重要危险因素。为了明确AZFc部分缺失型的关键基因拷贝数变异,我们对55例AZFc部分缺失患者的 DNA 进行 MLPA(Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification)检测,获得了 AZFc区D4Z、BPY2和CDY等关键基因的拷贝数,共发现了 13种CNV变异体,其中6种CNVs发生在26例gr/gr缺失亚型中,3种发生在23例b2/b3缺失亚型中,其余4种发生在6例特殊亚型中。同时,结合相应基因拷贝数变异和STS位点信息,我们对13种CNV变异体的基因组结构进行了断裂位点的分析,发现其中8种基因重复-缺失并存的复杂重组类型未见报道。这些CNV变异体的发现为进一步研究AZF区遗传结构及其在精子发生过程中的作用机制研究提供了实验依据。为了探讨AZFc部分缺失对ART治疗妊娠结局的影响,我们以病例-对照的形式,考察了 AZFc部分缺失的夫妇通过IVF/ICSI(In Vitro Fertilization/辅助生殖技术治疗后的胚胎情况和妊娠结局,发现了 25例接受ICSI(Intracytoplasmic Sperm Injection)治疗的病例组的受精率和高质量胚胎率明显低于对照组,而两组之间在卵裂率、生化妊娠率和临床妊娠率上无明显差异;gr/gr缺失组的受精率明显低于对照组;gr/gr缺失组与b2/b3缺失组进行比较时,前者的卵裂率明显高于后者。这些结果提示,gr/gr缺失可能会影响ICSI治疗的受精率,而b2/b3缺失对于胚胎卵裂的影响程度更深。
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R698.2
【部分图文】：

若仅有ＳＹ１２９１和ｓＹｌ邋１８９的缺失则判断为ｇｒ／ｇｒ缺失型；若仅有ｓＹｌ邋１９２和逡逑ＳＹ１１９１的缺失代表ｂ２邋／邋ｂ３缺失型；若发生ｓＹ１１９１、ＳＹ１１９７和ＳＹ１２９１的联合逡逑缺失则代表ｂｌ／ｂ３缺失型（如图１．１所示）。逡逑ｓＶＩＩ９７邋ｓＶＩｌ？）２邋ｓＶ２５５逦ｓＶ２５５逡逑逦Ｉ逦－Ｕ－邋４Ｔ－ｓＹＵ，ｊｉ邋—＇ｌ；逦逦逡逑ｓＶ１１９１邋ｓＶ２５４逦ｓＶ２５４逡逑图１．１邋ＡＺＦｃ区扩增子序列和部分ＳＴＳ位点逡逑１逡逑

逦＾邋＜２＾邋＾逦Ｓ逡逑图１．２邋ｂ２／ｂ４缺失形成机制逡逑２．２逦ｇｒ／ｇｒ缺失型逡逑该缺失类型为两段同向重复序列ｇｌ－ｒｌ－ｒ２和ｇ２－ｒ３－ｒ４发生了同源重组，删除逡逑了约１．６Ｍｂ片段［２３】。根据扩增子的相似度及序列排列方向，ｇｒ／ｇｒ缺失类型还可逡逑分为三种亚型：ｇｌ／ｇ２、ｒｌ／ｒ３、ｒ２／ｒ４，即分别为ｇｌ和ｇ２扩增子之间、ｒｌ和ｒ３扩逡逑增子之间、以及ｒ２和ｒ４扩增子之间发生同源重组而产生的缺失类型Ｉ２３，２＇逡逑ＳＹ１２９１是该区域内的单拷贝ＳＴＳ位点，是检测ｇｒ／ｇｒ缺失的代表性位点。ｇｒ／ｇｒ逡逑缺失可能会造成关键基因拷贝数减少，如４个拷贝的ＺＸ４Ｚ基因常减少２个。逡逑２逡逑

（引自邋Ｒｅｐｐｉｎｇ邋Ｓ，ｅｔ邋ａｌ．邋Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２００４，８３（６）：邋１０４６－５２）逡逑２．４邋ｂｌ／ｂ３缺失型逡逑这种缺失类型发生率较低，其发生机制与ｂ２／ｂ４缺失相似，扩增子ｂｌ与ｂ３逡逑因相同的序列方向发生了同源重组，导致两者之间近１．６Ｍｂ的片段缺失［２３］。逡逑｜逦逦ＡＺＦｃ逦逦逦ｊ逡逑口 ａｉｉ］＿邋－Ｉ邋｜，》ｆ：４＾ＢＳＥ＋ｎ４＾—？＾ｚｚｚ＾ｚｚ＾ａｓｅｓ—二逡逑…逡逑＾逦＜｜—逦逡逑？逡逑

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本文编号：2833269