Intermedin通过诱导血红素加氧酶-1减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾脏纤维化

发布时间：2020-10-10 06:51

　　 目的:Intermedin[IMD,又称肾上腺髓质素-2(ADM-2)]能够通过抑制肾组织局部的氧化应激来减轻肾脏纤维化,但是确切机制尚不清楚。血红素加氧酶-1(HO-1)具有抗纤维化作用。既往有研究表明,与IMD同源、结构和功能类似的ADM可以诱导HO-1产生。但IMD对HO-1是否有影响目前尚未见报道。本实验通过研究IMD对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠及大鼠近端小管上皮细胞系(NRK-52E)HO-1的影响,阐明IMD是否通过诱导HO-1减轻肾纤维化。方法:用雄性Wistar大鼠制作UUO模型诱导肾纤维化。用重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)刺激NRK-52E以建立体外上皮-间充质转分化(EMT)模型。将质粒pcDNA3.1-IMD转染UUO大鼠梗阻侧肾脏组织和NRK-52E,使IMD高表达。用锌原卟啉(ZnPP)抑制HO-1酶活性,观察IMD是否通过抑制HO-1起到肾脏保护作用。用定量RT-PCR、Western blot法或免疫组织化学法检测IMD对HO-1表达的影响。通过胆红素的产生量来测定HO活性。Masson染色观察肾脏病理改变并进行半定量分析,用RT-PCR法检测胶原蛋白I的mRNA表达,用Western blot法检测其蛋白质表达。通过免疫组织化学法分析巨噬细胞浸润和IL-6表达的情况,以评估炎症反应。通过Western blot法及免疫荧光法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白表达来评估EMT。结果:转染IMD基因的UUO大鼠梗阻侧肾脏和NRK-52E中HO-1表达和HO活性增加,说明IMD能诱导HO-1。UUO模型梗阻侧肾脏在术后第7 d表现出明显的间质纤维化,IMD基因转染的UUO大鼠梗阻侧肾脏间质纤维化程度明显减轻。UUO大鼠梗阻侧肾脏有大量巨噬细胞浸润,IL-6表达明显升高,转染IMD后能抑制巨噬细胞的浸润和IL-6的表达,说明IMD能抑制肾脏局部炎症反应。UUO大鼠的梗阻侧肾脏和NRK-52E中E-钙粘蛋白的表达下调,同时α-SMA的表达增加,表明发生了EMT,IMD基因转染能抑制EMT。HO活性抑制剂ZnPP能阻断IMD的肾脏保护作用。结论:IMD可以通过诱导HO-1来减轻肾脏纤维化。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R692
【部分图文】：

山西医科大学（博）硕士学位论文2 结 果.1 IMD 转染结果通过定量 RT-PCR 和 western blot 法检测 IMD 的转染结果。实验结果显示 7 d 后，与转染空质粒组相比，用质粒 pcDNA3.1-IMD 转染的 UUO 大鼠梗脏（图 1a-c）和 NRK-52E 中 IMD 的表达显著增加（图 1d-f）。证明 IMD染到 UUO 大鼠梗阻侧肾脏或 NRK-52E 中。

山西医科大学（博）硕士学位论文结果显示，在假手术大鼠肾组织中 HO-1 的 mRNA 和蛋白质表达水平非常低，而在 UUO 大鼠梗阻侧肾脏中表达显著增加。转染 IMD 质粒后梗阻侧肾脏中 HO-1的表达进一步增加，而空质粒组 HO-1 水平与 UUO 组无明显差别。用 IMD 和 ZnPP共处理的 UUO 大鼠梗阻侧肾组织中 HO-1 mRNA 和蛋白质的表达水平较 IMD 处理组进一步增加（图 2a 和 b）。通过免疫组织化学方法也证实了 IMD 基因转染后 HO-1的表达上调，加入 ZnPP 后，HO-1 的表达较单纯 IMD 转染组进一步增加，而空质粒转染不影响 HO-1 的表达水平（图 2c）。与假手术组相比，UUO 梗阻侧肾脏中的 HO 活性显著增加。转染空质粒对 HO 活性没有明显影响，转染 IMD 后 UUO 梗阻侧肾脏中的 HO 酶活性较 UUO 组明显升高。加入 ZnPP 的后 IMD 的上述作用消失（图 2d）。

15图 3 IMD 对 rhTGF-β1 刺激的 NRK-52EHO-1 表达和 HO 活法检测 NRK-52E 中 HO-1 蛋白质表达水平的代表性结果。b。与假手术组对比，*P＜0.05，与 UUO 组对比，#P＜0.05，过诱导 HO-1 抑制 UUO 大鼠梗阻侧肾脏纤间质纤维化用 Masson 染色及 Col-I 的表达量来检测。手术组中没有发现明显的纤维化表现。与假手术组侧肾脏出现了明显的肾小管间质纤维化。而 IMD 质小管间质纤维化较前明显减轻。为了确定 IMD 是否

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