LncRNAH19通过下调miRNA-103促进高磷诱导的VSMCs钙化的研究

发布时间：2020-10-14 03:10

　　 目的:慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)病人较常见的心血管并发症是血管钙化,然而血管钙化又是CKD患者发生心血管事件的重要危险因素之一。最近研究表明,血管平滑肌细胞发生表型转化是CKD血管钙化的关键环节。长链非编码RNA(lncRNA)H19在血管平滑肌细胞表型转化中发挥重要作用。LncRNA H19是否参与血管钙化的调控?分子机制是什么?目前尚不清楚。因此本研究旨在探讨LncRNA H19在VSMC钙化中的发挥的作用及其可能机制。方法:1.采用体外移植组织块培养原代VSMCs;高磷刺激VSMCs诱导钙化。将VSMCs随机分为4组:正常对照组、高磷组、高磷+shRNA H19组、高磷+shRNA对照组。2.高磷刺激VSMCs 7d、14d后,检测ALP活性、茜素红染色及钙含量。3.采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测LncRNA H19、miR-103、miR-675、mRNA Runx2、mRNA BMP-2的表达。4.采用Western blotting检测Runx2、BMP-2蛋白的表达。5.统计分析实验数据分析应用SPSS 17.0软件。单因素方差分析(ANOVA)应用于组间比较,SNK(Student-Newman-Keuls)检验应用于组内两两比较,认为P0.05时,差异是具有统计学意义的。结果:1.高磷诱导VSMCs的钙化情况茜素红染色结果显示,与正常对照组相比,高磷刺激7天、14天组可见大量橘红色钙盐沉积,且14天较7天明显。钙含量测定结果显示,高磷刺激7天、14天组钙含量增加,且14天较7天明显(P0.001)。2.高磷诱导的VSMCs ALP活性、及Runx2、BMP-2表达情况ALP活性检测结果示,与正常对照组相比,高磷刺激7天、14天组ALP活性增加,且14天较7天明显(P0.001)。qRT-PCR和Western Blot结果示,各组VSMCs培养7天、14天后,与正常对照组相比,高磷组Runx2、BMP-2的表达水平明显升高,且14天较7天明显(P0.05)。与高磷组相比,高磷+shRNA H19组Runx2、BMP-2的表达水平明显降低(P0.05)。3.高磷诱导的VSMCs LncRNA H19、miR-103、miR-675的表达情况实时荧光-PCR结果显示,与正常血管平滑肌细胞对比,高磷刺激VSMCs后,LncRNA H19、miR-675的水平明显升高,且高磷刺激14天较7天的明显(P0.05);高磷组miR-103的表达水平明显降低,且14天较7天明显(P0.05)。与高磷组相比,高磷+shRNA H19组LncRNA H19、miR-675的表达水平明显降低,miR-103的表达水平升高(P0.05)。结论:1.在高磷诱导的VSMCs钙化过程中,LncRNA H19、miR-675的表达水平升高,miR-103的表达水平下降。2.高磷诱导的VSMCs钙化,可能由LncRNA H19/miR-103/Runx2轴调控。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R692
【部分图文】：

图 1 各组大鼠 VSMCs 钙化染色情况(茜素红染色，×100)注：A：正常对照组 B：高磷刺激 7d 组 C：高磷刺激 14d 组Fig.1 Results of calcification staining in VSMCs(Alizarin red staining，×1#A: Normal control B: High phosphorus stimulation for7days C: Highphosphorus stimulation for 14 days表 1 各组大鼠 VSMCs 钙含量的比较（ x 士 s）Table 1 The content of calcium in rat VSMCs（ x 士 s）分组 VSMCs 钙含量（mg/g）正常对照组 20.94±1.28高磷 7d 组 62.11±3.84高磷 14d 组 112.9±15.012. 高磷刺激促进 VSMCs 发生表型转化

明显(P<0.001)（表 2）。qRT-PCR 结果显示，各组 VSMCs 培养 7 天、14天后，与正常对照组相比，高磷组 mRNA Runx2、mRNA BMP-2 的表达水平明显升高，且干预14天mRNA升高较7天明显(P<0.05)(图2)。WesternBlot 结果显示，各组 VSMCs 培养 7 天、14 天后，与正常对照组相比，高磷组 Runx2、BMP-2 蛋白的表达水平明显升高，且干预 14 天蛋白较 7 天升高明显(P<0.05)(图 3)。上述结果表明，高磷刺激大鼠的血管平滑肌细胞，A BC

2 各组大鼠 VSMCs mRNARunx2、mRNABMP-2 的表达情况MCs mRNARunx2的表达情况 ②VSMCs mRNABMP-2的表达情A：正常对照组 B：高磷刺激 7d 组 C：高磷刺激 14d 组；*P< 0.05,*< 0.01,***P<0.001g.2 Expression of mRNARunx2 and mRNABMP-2 in VSMCs of ratsxpression of mRNARunx2 in VSMCs.②Expression of mRNABMP-2 VSMCsA: Normal control B: High phosphorus stimulation for7days C: Highphosphorus stimulation for 14 days;*P< 0.05,**P< 0.01,***P< 0.001unx2 BMP-2β-GP β-GP
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本文编号：2840089