Hedgehog信号通路介导血管周细胞参与肾间质纤维化的机制研究

发布时间：2017-04-04 22:04

  本文关键词：Hedgehog信号通路介导血管周细胞参与肾间质纤维化的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景和目的:肾间质纤维化(Renal interstitial fibrosis,RIF)是各种慢性肾病随病程进展到最终阶段的相同病理生理表现,严重威胁着患者健康。该病变表现肾间质中肌成纤维细胞显著增殖,细胞外胶原分泌增多,肾单位损伤及功能进行性下降为特征。因此,为探索行之有效的防治措施,需彻底明确该病变机制。肌成纤维细胞的来源一直是本病变探讨的焦点,相关文章表明,其来源或许涉及多种细胞。长期以来,肾小管上皮细胞-间叶细胞转分化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)机制得到众多学者首肯,但近来有学者提出不同观点,认为RIF与受Hh信号通路调节的周细胞的关系似乎更大。因此,本研究拟通过对Hh信号通路激活时周细胞各项特征变化的检测来探索Hh信号通路是否参与了周细胞向肌成纤维细胞方向转分化,并且是否可以被Hh信号通路的相应配体所干预。材料与方法:选用健康BALB/c乳鼠,雌雄不限,通过乳鼠肾细胞原代培养,用免疫磁珠分选技术分离纯化,并将所获得的细胞通过形态学观察和免疫细胞化学NG2、SMA和CD31检测,鉴定是否符合周细胞特征,经三次传代培养,收集周细胞。将已经纯化的周细胞分为对照组、SHH组和SHH+CPA组三组。对照组均于0 h、24 h分别加终浓度为0.2%BSA的PBS;SHH组于0 h、24 h分别加终浓度为1.5ng/mL SHH蛋白;SHH+CPA组在SHH组基础上于每个SHH的添加时间点前2 h加终浓度为0.25μm/mLCPA干预。干预结束后,均行免疫细胞化学sma检测、brdu掺入实验检测、细胞划痕实验检测和i型胶原elisa检测。结果:1.通过乳鼠肾细胞原代培养,免疫磁珠分离纯化,经倒置相差显微镜观察,形态学符合周细胞特征:细胞宽大扁平,形状不规则,并伴数个突起,胞核居中,单核或双核;ng2和sma免疫细胞化学染色阳性表达,cd31免疫细胞化学染色阴性表达,证实为周细胞。2.细胞经干预行上述检测,免疫细胞化学sma检测:对照组细胞质中阳性表达程度为121.3±13.7,shh组为168±21.0,shh+cpa组为132.1±19.8,即shh组阳性表达程度高于对照组,shh+cpa组阳性表达程度低于shh组,差异比较均有统计学意义(p0.05);细胞划痕实验检测:对照组细胞迁徙距离24h、36h和48h分别为8.2000±1.4832μm、16.8000±1.0955μm、25.4000±1.1402μm,shh组分别为15.6000±2.0736μm、21.8000±1.9235μm、35.2000±0.8367μm,shh+cpa组分别11.4000±1.9494μm、18.4000±1.5166μm、28.2000±0.4472μm,即相同时间点shh组细胞迁徙距离多于对照组,shh+cpa组细胞迁徙距离少于shh组,差异比较均有统计学意义(p0.05);brdu掺入实验检测:对照组增殖活性为0.52±0.11,shh组为0.67±0.12,shh+cpa组为0.55±0.09,shh组细胞增殖活性高于对照组,shh+cpa组细胞增殖活性低于shh组,两组差异比较均有统计学意义(p0.05);i型胶原elisa检测:对照组为5.36±0.52,shh组为9.22±0.68,shh+cpa组为7.8±0.63,即shh组细胞产生i型胶原的量多于对照组,shh+cpa组细胞产生i型胶原的量少于shh组,两组差异比较均有统计学意义(p0.05)。结论:1.利用免疫磁珠分选法可以成功分离纯化肾脏周细胞并继续培养。2.SHH可以通过上调Hh信号通路而促进肾周细胞向肌成纤维细胞方向发生表型转化。3.CPA可以抑制上述表型转化的程度。
【关键词】：周细胞 Hedgehog信号通路 SHH蛋白 Cyclopamine
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 设计思路13-14
• 材料与方法14-23
• 结果23-30
• 讨论30-37
• 结论37-38
• 参考文献38-43
• 英汉缩略词对照表43-44
• 致谢44-45
• 综述 肾间质纤维化发生机制研究进展45-53
• 参考文献50-53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王应利;郭斌;惠延年;张晓光;陈立军;马吉献;;免疫磁珠法原代分离培养大鼠视网膜微血管周细胞[J];眼科新进展;2005年06期

2 赵华;张凯;;Shh基因与消化道肿瘤的关系[J];医学综述;2013年02期

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本文编号：285975