炎症促进NPC1表达加重高脂负荷下肾系膜细胞胆固醇积聚致细胞损伤机制研究

发布时间：2020-10-29 17:42

　　 目的:本研究观察炎症因子IL 1-β对高脂负荷下人肾脏系膜细胞(Human glomerular mesangial cells,HMCs)C型尼曼匹克蛋白1(Niemann-pick Protein C1,NPC1)表达的影响,并初步探讨NPC1介导的胆固醇积聚导致肾系膜细胞损伤的作用机制。方法:体外培养HMCs,将其分为正常对照组、高脂组、高脂+炎症组。Western blot检测NPC1蛋白含量;酶法检测细胞总胆固醇及内质网胆固醇浓度;CCK8法检测细胞增殖变化;流式细胞术检测HMCs细胞周期;实时荧光定量PCR检测细胞内NPC1、GRP78、PERK、ATF6、FN、Col IV mRNA的表达;免疫荧光技术检测NPC1、GRP78、FN的荧光强度以及NPC1/LAMP-1共定位。予以NPC1阻断剂u18666a干预后,观察内质网胆固醇、细胞增殖以及GRP78、FN、Col IV mRNA水平的变化。结果:高脂可促进HMCs NPC1的表达,同时使细胞总胆固醇及内质网胆固醇水平增加,增殖加快、S期比例增加、内质网应激相关分子—GRP78、PERK、ATF6及系膜基质成分—FN、Col IV mRNA水平均显著增加,GRP78、FN的荧光强度也明显增加;炎症进一步上调高脂负荷下上述各指标水平。u18666a干预NPC1后可减轻高脂和炎症导致的内质网胆固醇积聚及细胞损伤。结论:炎症可通过上调NPC1表达,加重高脂负荷下肾系膜细胞内质网胆固醇积聚,诱发内质网应激及细胞损伤。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R692
【部分图文】：

各组HMCsNPC1的表达

检测各组 HMCs NPC1 的表达&平均荧光强度 (400×)。*p<0.05,**p<0.01 与对照组比较▲p<0.05 与高脂+炎症组比较。mmunofluorescence detection of NPC1 & Mean fluorescence intensity in different groups(400×). *p<0.05,**p<0.01 vs CTL group, ▲p<0.05 vs LDL+IL-1β group./LAMP-1 免疫荧光共定位相关膜蛋白（Lysosome Associated Membrane Protein-1,LAMP-1）是溶记蛋白，共聚焦显微镜下观察 NPC1 和 LAMP-1 共定位。NPC1 在呈红光，LAMP-1 在 FITC 激发呈绿光。半定量分析共定位系数rrelation，结果（图 3）所示：与对照组（0.52±0.03）相比，高脂+

29PC1/LAMP-1 免疫荧光共定位&共定位系数 (400×).*p<0.05 与对照组比较，高脂+炎症组比较。unofluorescence colocalization of NPC1/LAMP-1 & Pearson's Colocalization igroups (400×). *p<0.05 vs CTL group, ▲p<0.05 vs LDL+IL-1β group.胞内总胆固醇及内质网胆固醇浓度 4）所示：细胞内总胆固醇浓度及内质网胆固醇浓度，与对照组（64.117±5.41）相比，高脂组（88.13±6.98，65.99±3.97）、高脂+炎症10.46，92.39±4.83）均显著增加（P 分别<0.05，<0.001）；与高脂症+炎症组细胞内及内质网胆固醇沉积进一步增加（P 均<0.05）。提
【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 于小函;邸波;;肾小球系膜细胞与糖尿病肾病[J];医学研究杂志;2015年09期

2 刘练;张高福;李秋;王墨;;阿霉素肾病小鼠的肾脏病理转变过程[J];中国实验动物学报;2014年02期

本文编号：2861239