肾缺血再灌注后脑血管对血管紧张素Ⅱ反应增强的作用机制研究

发布时间：2020-11-19 00:12

　　 目的:急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)是临床上常见的并发症,具有高发病率和死亡率的特点。近年来研究揭示了 AKI引发的多器官功能衰竭是其死亡率高居不下的重要原因。本研究目的是探究AKI小鼠脑血管对Ang Ⅱ反应性变化以及成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor2,FGF2)在这一过程中的作用机制。方法:本实验用雄性C57BL/6小鼠双肾动脉夹闭30 min后恢复血流灌注24 h构建急性肾损伤模型,并在复灌第20 h给予成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR)1/2/3 抑制剂 BGJ398(10 mg/kg)进行灌胃处理。实验分为三组:假手术组(Sham组)、急性肾损伤组(AKI组)以及急性肾损伤并BGJ398治疗组(AKI+BGJ398组)。缺血复灌24h后,采用眼球球后取血,检测血清肌酐和血尿素氮水平,并取肾脏组织固定切片进行苏木精-伊红染色后观察肾脏病理变化。分离脑基底动脉和脑后交通动脉,运用多通道血管张力测定系统(DMT)检测脑血管张力,研究脑血管对AngⅡ等血管活性药物的反应和张力变化。采用实时荧光定量PCR方法检测肾、脑血管组织的FGF2、成纤维细胞生长因子结合蛋白1(FGFBP1)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、血管紧张素受体(AT1R,AT2R)、胞内信号分子PLCγ和PLCβ的mRNA水平变化。结果:本研究结果表明,AKI条件下,脑血管对Ang Ⅱ收缩性反应特异性增强,体外孵育FGF 2和FGFBP1可以进一步增强这种反应。分别在在体和离体条件下给予FGFR下游特异的酪氨酸激酶抑制剂能有效抑制这种脑血管Ang Ⅱ收缩反应。AKI组与Sham组相比,其血清中FGF2mRNA水平明显升高。Real-time PCR结果证实了脑血管中FGFR和部分胞内信号通路PLC亚型mRNA水平升高。结论:FGF2增强AKI的小鼠脑血管AngⅡ反应性,这种作用是通过FGFR和酪氨酸激酶通路PLC等多因素介导产生,FGF2与AngⅡ在血管收缩上的协同作用是AKI导致脑损伤的重要原因之一。
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R692
【文章目录】：
致谢
摘要
ABSTRACT
缩写、符号清单、术语表
1 前言
2 实验材料
    2.1 主要药品与试剂
    2.2 主要仪器和设备
3 实验用相关溶液配制
    3.1 生理实验相关缓冲液配制
    3.2 血管张力检测相关试剂配制
4 实验对象和实验方法
    4.1 实验动物
    4.2 实验设计和分组
    4.3 肾功能指标
    4.4 肾脏切片苏木精-伊红染色
    4.5 小鼠脑血管的分离
    4.6 血管标准化及血管活性检测
    4.7 小鼠脑血管给药方案及张力测定
    4.8 血清FGF 2浓度检测
    4.9 铁灌注法分离提取小鼠肾小球球前动脉和脑动脉
    4.10 RNA提取
    4.11 反转成CDNA
    4.12 实时定量PCR
5 统计学处理
6 结果
    6.1 小鼠肾缺血再灌注24 H后肾功能变化
    6.2 小鼠肾缺血再灌注24 H后肾脏组织结构变化
    6.3 小鼠肾缺血再灌注24 H后脑基底动脉和后交通动脉对ANGⅡ,NE和ET-1的反应性变化
    6.4 小鼠肾缺血再灌注24 H后血清中FGF 2浓度水平升高
    6.5 FGF 2和FGFBP 1增强脑血管对ANGⅡ的反应性
    6.6 体外给予FGFR酪氨酸激酶特异性抑制剂显著降低脑血管对ANGⅡ的反应性
    6.7 体内给予FGFR酪氨酸激酶特异性抑制剂BGJ398预处理后,抑制AKI小鼠脑血管对ANGⅡ的反应性
    6.8 AT1R特异性受体拮抗剂ZD1755抑制脑血管对ANGⅡ的反应性
    6.9 实时荧光定量PCR检测肾脏和脑血管及组织中FGF 2,FGFBP 1,AT1R和AT2R MRNA水平变化
    6.10 实时荧光定量PCR检测肾小球球前动脉和脑动脉FGFRs受体家族及其下游PLCB和PLCr的MRNA水平变化
7 讨论
参考文献
综述
    参考文献
个人概况
学习经历
发表文章

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本文编号：2889410