Db/db小鼠肾脏足细胞自噬与凋亡变化及白藜芦醇干预影响及机制研究

发布时间：2020-12-08 17:47

　　背景:糖尿病患者约30%可合并糖尿病肾病（DN）,缓慢进展引起尿毒症;在欧美、日本等发达国家,糖尿病肾病已经是慢性肾病（CKD）及尿毒症的最主要病因。所以探索糖尿病肾病的发病机制,为治疗糖尿病肾病提供新靶点具有重要意义。近年来研究发现,肾小球脏层上皮细胞,即足细胞（podocyte）在糖尿病肾病蛋白尿产生及发展过程中起重要作用,因此,保护足细胞免受损伤是阻断DN发生和进展的关键所在。但目前对导致足细胞损伤的确切细胞内信号机制尚不清楚。而且,目前治疗糖尿病肾病的手段还很有限,更缺乏保护足细胞、减少其凋亡的有效治疗药物。自噬是细胞对多种应激的适应性反应,能够降解受损的细胞器和蛋白质,从而维持细胞内环境的稳定。自噬对肾脏有保护作用,正常情况下,体内肾脏足细胞保持高水平的基础自噬,而糖尿病肾病时足细胞自噬活性下降。白藜芦醇（Resveratrol）,化学名为芪三酚（3’,5’,4’-trihydroxystibene）,属于非黄酮类多酚化合物,具有清除自由基、抗炎症、抗肿瘤等多种药理作用。在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠、db/db小鼠的研究中白藜芦醇干预能减轻蛋白尿、改善肾功能,但白藜芦醇作用的... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：85 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
前言
    参考文献
第一部分 :白藜芦醇对db/db小鼠肾功能、微量蛋白尿的影响
    材料与方法
        1 实验材料
            1.1 主要仪器设备
            1.2 主要试剂和药品
        2 实验方法
            2.1 建模与分组
            2.2 标本收集与处理
            2.3 测量血糖
            2.4 测量血压
            2.5 血肌酐、尿素氮的检测
            2.6 24小时尿微量白蛋白量测定
    统计学方法
    结果
        1 各组小鼠肾重、体重、肾重/体重指数的比较
        2 各组小鼠血糖、血压的比较
        3 各组血尿素氮、血肌酐、24h尿微量白蛋白的变化
第二部分 :白藜芦醇对db/db小鼠肾脏足细胞自噬和凋亡的影响
    材料与方法
        1 实验材料
            1.1 主要仪器设备
            1.2 主要试剂和药品
            1.3 培养细胞方面:
        2 实验方法
            2.1 肾组织HE染色
            2.2 肾组织PAS染色
            2.3 肾组织透射电镜观察
            2.4 免疫组化法检测肾脏组织nephrin蛋白表达
            2.5 肾组织免疫荧光共染色检测
            2.6 细胞培养
            2.7 Western blot 实验
            2.8 透射电镜观察
            2.9 细胞凋亡率测定
            2.10 细胞免疫荧光
    统计学方法
    结果
        1 HE和PAS染色下各组小鼠肾组织病理改变
        2 肾小球中足细胞nephrin及cleaved-caspase 3蛋白表达情况
        3 透射电镜下各组小鼠肾脏超微结构及足细胞的改变
        4 白黎芦醇对高糖状态下足细胞凋亡的影响
        5 肾组织中的自噬蛋白LC3 Ⅱ,synaptopodin蛋白表达情况
        6 白黎芦醇对高糖状态下足细胞自噬的影响
第三部分 白藜芦醇可以通过增加足细胞自噬,降低高糖诱导足细胞凋亡
    材料与方法
        1 实验材料
            1.1 主要仪器设备
            1.2 主要试剂和药品
        2 实验方法
    统计学方法
    结果
        1 自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤（3 -methyladenine,3-Ma）抑制自噬对白藜芦醇干预高糖所致足细胞凋亡的影响
        2. Atg5基因沉默抑制自噬对白藜芦醇干预高糖所致足细胞凋亡的影响
讨论
参考文献
文献综述
    参考文献
攻读学位期间发表文章情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]姜黄素对db/db小鼠肾组织p-STAT3及IκB蛋白的影响[J]. 陆苗苗,陶立坚,梅文娟,骆仁娜,府晓,汪凌昊,杨文君,刘春燕.  中南大学学报(医学版). 2014(06)
[2]大黄酸对db/db小鼠糖尿病肾病疗效的观察[J]. 朱加明,刘志红,黄燕飞,陈惠萍,周虹,王建平,黎磊石.  肾脏病与透析肾移植杂志. 2002(01)



本文编号：2905440