肾损伤时MPP5与钾离子波动及炎症因子的相关变化分析

发布时间：2017-04-08 07:18

  本文关键词：肾损伤时MPP5与钾离子波动及炎症因子的相关变化分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：观察庆大霉素(GM)、腺嘌呤(Adenine)致大鼠肾损伤时血钾的波动情况,探讨棕榈酰化膜蛋白5(MPP5)蛋白在肾损伤后对K+的调节作用；研究GM、环孢素A (CsA).顺铂(DDP)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤后,MPP5与炎症因子的变化及其相关性。方法：1.64只大鼠随机分为正常对照组,GM 7、10、15、20d组,每组8只。GM组腹腔注射GM 100mg·kg-1,正常对照组给予同等体积的溶媒溶液,分别在腹腔注射8d、11d、16d、21d每组取8只大鼠,腹主动脉取血,分离血清,检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、钠(Na+)、钾(K+)、氯(C1-)、肿瘤坏死因子(TNF-a)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)；收集24h尿液,检测尿液中肌酐(Cr)、钠(Na+)、钾(Cl-)、氯(C1-)、肾损伤分子-1(KIM-1)；肾脏组织进行组织病理学检测。Western blot.免疫组化(IHC)检测肾组织中MPP5蛋白表达情况,Western blot检测肾组织中NF-κB蛋白表达情况。2.32只大鼠随机分为正常对照组,Adenine 15.30d组,每组8只。Adenine组给予Adenine 250mg·kg-1灌胃,正常对照组给予同等体积的溶媒溶液,分别在灌胃16d、31d每组取8只大鼠取血,腹主动脉取血,分离血清,检测血清中BUN、Cr、Na+、K+、 Cl-、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8;收集24h尿液,检测尿液中Cr、Na+、K+、Cl-、KIM-1;肾脏组织进行组织病理学检测。Western blot、IHC检测肾组织中MPP5蛋白表达的变化,Western blot检测肾组织中NF-κB蛋白表达情况。3. GM (0.0625、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00mg·ml-1)、CsA (1.25、2.50、 5.00、10.00、20.00、40.00、80.00、160.00μM)、DDP (1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、 40.00、80.00、160.00μM),分别作用于HK-2细胞24h,用MTT法检测GM、CsA、DDP作用下HK-2细胞增殖情况；观察GM、CsA、DDP对细胞的形态变化的影响；检测GM (0.5、1.0、2.0 mg·ml-1)、CsA (2.5、5.0、10.0μM). DDP (2.5、5.0、10.0μM)作用于HK-2细胞24h后,细胞释放乳酸脱氢酶(LDH)的变化情况；Western blot、免疫荧光(IF)检测HK-2细胞中MPP5、转录因子NF-κB、酪氨酸蛋白IKBa、环氧酶-2(COX-2)蛋白的表达情况。结果：1.大鼠连续腹腔注射GM后体重增长幅度放缓,尿量先增加后减少,血清中Cr、BUN显著升高(P0.01,P0.001)。GM7d组血清中C1-较对照组升高(P0.05),K+有升高趋势(P0.05),Na+变化不大,尿液中K+、Na+、Cl-明显减少(P0.05,P0.001)；TNF-α、IL-6、IL-8升高(P0.05,P0.01),IL-1没有明显变化(P0.05);MPP5表达有降低趋势(P0.05)；病理结果显示,大鼠肾小管上皮细胞出现水肿,部分细胞萎缩、坏死且有空泡形成。10d组血清中K+较对照组有升高趋势(P0.05),Na+、Cl-降低(P0.05,P0.001)；尿液中Na+、Cl-含量降低(P0.05),与7d组比较有升高趋势；TNF-α、IL-6、IL-8升高明显(P0.05),IL-1变化不大,NF-κB表达升高；MPP5表达降低(P0.05)；病理结果显示,大鼠肾小管上皮细胞出现萎缩且伴有空泡。15d组血清中K+、Na+变化不大,Cl"降低(P0.001)；尿液中K+、Na+趋于正常水平,Cl-有升高趋势(P0.05)；TNF-α、IL-6、IL-8升高(P0.05,P0.01),IL-1没有明显变化；MPP5表达较10d有升高趋势；病理结果显示,肾小管严重萎缩且伴有空泡形成。20d组血清中K+、Cl-降低(P0.05, P0.01), Na+水平稳定；尿液中K+浓度有升高趋势(P0.05), Na+、Cl-较对照组没有变化；TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8升高(P0.05,P0.01); MPP5表达减少(P0.01)；病理结果显示,肾小管出现严重萎缩且伴有空泡形成。2.大鼠用Adenine连续灌胃30d,体重增长幅度由相对减慢逐渐变为迅速减轻,尿量明显增加(P0.001),尿液中KIM-1含量以及血清中Cr、BUN浓度明显升高(P0.05,P0.001)。Adeninel5d组血清中K+、Na+、CI-较对照组明显增多(P0.05,P0.01),尿液中K+、Na+、Cl-显著降低(P0.01,P0.001)；炎症因子TNF-α、IL-1、IL-8升高(P0.01),IL-6变化不明显,NF-κB表达升高；MPP5表达有升高趋势；病理结果显示,大鼠肾小管上皮出现严重坏死,有大量炎细胞浸润,管腔内有结晶沉积。30d组血清中K+、Na+浓度偏高,同15d比较含量略有增加(P0.01),CI-水平恢复至正常；尿液中K+、Na+、Cl-含量较低(P0.01, P0.001); TNF-α IL-1、IL-8升高明显(P0.05,P0.001),IL-6没有变化；与15d组比较,MPP5表达量明显下降(P0.05)；病理结果显示,大鼠肾小管上皮细胞出现严重皱缩坏死,伴随炎细胞浸润,细胞核增大,肾小管扩张且有结晶沉积。3.MTT结果显示,GM、CsA、DDP能够抑制HK-2细胞增殖,并且呈现剂量依赖性；在倒置显微镜下观察GM0.5、1.0、2.0 mg·kg-1、CsA 2.5、5.0、10.0μM,DDP 2.5、5.0、10.0μM剂量分别作用于HK-2细胞24h后,各组细胞形态均发生改变,表现明显皱缩；细胞上清中LDH含量随着给药剂量的升高而增加(P0.05,P0.01,P0.001),且表现出剂量依赖性；用Western blot及IF的方法检测上述细胞匀浆发现：细胞中MPP5蛋白表达情况随着药物剂量的提高而降低；IKBa蛋白表达下调；NF-κB、COX-2蛋白表达上调。结论：1.肾损伤时,血清K+浓度和尿量发生波动性改变,游离态MPP5可能通过影响钾离子分泌发挥调控机体K+含量的重要作用。随着肾损伤程度加重,游离态MPP5表达总体趋势逐渐降低,炎症反应加强,可能是合成MPP5复合蛋白增加促进炎症反应发生。2.GM、CsA、DDP能够引起HK-2细胞损伤并释放炎症因子,细胞损伤时游离的MPP5蛋白含量下降。随着细胞损伤程度加重,游离态MPP5与NF-κB变化趋势相反,结合整体实验结果可以推测MPP5与NF-κB之间可能存在相互作用关系。
【关键词】：肾损伤 K~+ MPP5 NF-κB
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-16
• 第一章 急性肾损伤进程中钾离子变化及NF-κB相关炎症反应的研究16-35
• 1. 实验材料17-19
• 2. 实验方法19-23
• 3. 实验结果23-32
• 4. 讨论32-34
• 5. 本章小结34-35
• 第二章 慢性肾损伤进程中钾离子变化及NF-κB相关炎症反应的研究35-50
• 1. 实验材料35-37
• 2. 实验方法37-39
• 3. 实验结果39-48
• 4. 讨论48-49
• 5. 本章小结49-50
• 第三章 药物诱导HK-2细胞损伤MPP5与NF-κB变化相关性的研究50-67
• 1. 实验材料50-52
• 2. 实验方法52-55
• 3. 实验结果55-65
• 4. 讨论65-66
• 5. 本章小结66-67
• 全文小结67-68
• 综述 与肾损伤相关的信号通路研究进展68-72
• 参考文献72-77
• 前言72-74
• 第一章74
• 第二章74
• 第三章74-75
• 综述75-77
• 附录 英文缩略词对照表77-78
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果78-79
• 致谢79

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 易铁男,周云峰,伍钢;Caspase家族与细胞凋亡的研究进展[J];国外医学(肿瘤学分册);2001年01期

2 戴昕;李占全;冀林华;;凋亡相关蛋白Caspase研究进展[J];中国现代医药杂志;2010年04期

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本文编号：292367