慢病毒介导的p21/Waf1基因沉默增强膀胱癌特异性溶瘤腺病毒的复制及对EJ细胞增殖的抑制作用

发布时间：2020-12-28 05:46

　　目的 :沉默人膀胱癌EJ细胞中p21/Waf1基因的表达,并探讨p21/Waf1表达下调对膀胱癌特异性溶瘤腺病毒复制及对EJ细胞增殖的影响。方法 :设计并合成特异性针对p 21/Waf 1基因的sh RNA,插入含绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）编码基因的p Magic 7.1载体,构建p21/Waf1-sh RNA重组慢病毒质粒p LVT1051,并进行PCR和测序鉴定。将p LVT1051、p CMV-VSV-G和p CMV-d R8.91三种质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒。将携带有p21/Waf1-sh RNA的慢病毒感染EJ细胞,采用嘌呤霉素筛选p21/Waf1-sh RNA稳定转入的EJ细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测p21/Waf1-sh RNA稳定感染后EJ细胞中p21/waf1 m RNA和蛋白的表达水平。将膀胱癌特异性溶瘤腺病毒Ad/PSCAE/UPⅡ/E1A感染p 21/waf 1基因沉默的EJ细胞,采用蛋白质印迹法检测病毒复制相关指标E1A和Hexon蛋白的表达水平,MTT法检测腺病毒Ad/PSC... 

【文章来源】：肿瘤. 2015年10期 北大核心

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1材料与方法
    1.1细胞和试剂
    1.2方法
        1.2.1构建p21/Waf1-sh RNA慢病毒载体
        1.2.2慢病毒的包装及效价的测定
        1.2.3慢病毒感染EJ细胞
        1.2.4嘌呤霉素浓度的筛选
        1.2.5稳定感染p21/Waf1-sh RNA膀胱癌EJ细胞的筛选
        1.2.6实时荧光定量PCR检测稳定感染p21/ Waf1-sh RNA的EJ细胞中p21/Waf1 m RNA的表达水平
        1.2.7蛋白质印迹法检测p 21/Waf 1基因沉默后对EJ细胞中p21/Waf1蛋白表达的影响以及腺病毒Ad/PSCAE/UP Ⅱ /E1A感染后对p21/Waf1基因沉默的EJ细胞中E1A和Hexon蛋白表达的影响
        1.2.8 MTT法检测腺病毒Ad/PSCAE/UP Ⅱ E1A对p 21/Waf 1基因沉默的EJ细胞增殖的影响
        1.2.9统计学方法
2结果
    2.1携带p21/Waf1-sh RNA重组慢病毒载体的测序结果
    2.2重组慢病毒感染EJ细胞
    2.3重组慢病毒对EJ细胞中p21/Waf1 m RNA及蛋白表达的影响
    2.4膀胱癌特异性溶瘤腺病毒对p21/Waf1表达沉默的EJ细胞中E1A和Hexon蛋白表达的影响
    2.5膀胱癌特异性溶瘤腺病毒Ad/PSCAE/UP Ⅱ /E1A对p21/Waf1沉默的EJ细胞增殖的影响
3讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]小RNA干扰沉默CD147基因对膀胱癌T-24细胞生物学行为的影响[J]. 薛义军,孙志熙,邹晓峰,肖日海,张国玺,袁源湖,龙大治,吴玉婷,徐刚.  肿瘤. 2012(05)
[2]小鼠尿路斑块2启动子对人细胞特异性及表达调控研究[J]. 朱宏建,张智清,曾祥福,魏守顺,徐春晓,黄国锦,郭应禄.  中华实验外科杂志. 2003(11)



本文编号：2943228