细胞-晶体反应中外泌体的miRNAs表达谱分析及其调控巨噬细胞极化的初步研究
发布时间：2020-12-29 08:04
目的:明确细胞-晶体反应中外泌体miRNAs的表达谱,筛选出可能参与草酸钙肾结石形成的miRNA,并初步探讨外泌体及其miRNA调控巨噬细胞极化的机制。方法:以0、0.25、0.5、1、2、4、5、8、10 mmol/L的草酸与HK-2细胞作用48h,分别通过CCK-8法检测各组HK-2细胞的生存率;光镜下观察各组HK-2细胞的形态学变化;LDH法检测各组HK-2细胞的损伤情况。在此基础上选择0、2 mmol/L的草酸作用HK-2细胞48h,超高速离心法分别提取两个细胞系中的外泌体,并使用透射电镜、Western Blot和Nanosight纳米颗粒跟踪分析仪对外泌体进行鉴定。采用高通量miRNA生物芯片技术,检测2 mmol/L组与0 mmol/L组中外泌体中miRNA的表达谱,通过mirPath v.3数据库对miRNA进行靶基因预测;进行GO（Gene Ontology）分析和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）pathways分析寻找表达谱中差异性表达的miRNA所对应的靶基因及其富集的功能和信号通路,进一步构建miRNA-...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：147 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
0～4mM草酸组的HK-2细胞生存率：从0mM组到0.5mM组，差别无统计学意义（P＞0.05）；从1mM组到10mM组，差别有统计学意义（*P＜0.05；**P＜0.01）
图 1-2 光镜下 HK-2 细胞经 0～4 mM 草酸干预后的形态学特征（×100，200）正常；B 组细胞形态大致正常，密度稍有减少；C 组细胞形态开始变异，密度减显减少，出现明显纤维化及变性坏死。Figure1-2 Morphological characteristics of HK-2 cells under different concent00,200). The cell morphology and density were normal in group A; The cell morphal and the density was slightly decreased in group B; The cell morphology begansity decreased in group C; The cell density was significantly reduced,showing obeneration and necrosis in group D.3. LDH 法检测细胞活力各组 LDH 的含量：0 mmol/L 组为（100±14.80）%；1 mmol/L 11.10）%；2 mmol/L 组为（254.67±26.11）%；4 mmol/L 组
胞-晶体反应中外泌体的 miRNAs 表达谱分析及其调控巨噬细胞极化的初步研究 2018 届博士学位论±13.32）%，组间比较差别有统计学意义（*P＜0.05，**P＜0.01）（图 1-3图 1-3 0～4 mM 草酸组的 LDH 表达情况，1～4 mM 组差别有统计学意义（*P＜0.05；**P＜0.01Figure 1-3 From 1mM group to 4mM group, the significant difference were obvious(*P＜0.05;**P.01).4. 外泌体的鉴定4.1 透射电镜下外泌体的形态结构各组均可产生这种大小均匀、形态一致的圆形或椭圆形的囊泡，部囊泡有融合现象。外泌体直径均介于 30～100nm 之间，平均约 80nm。外泌体外周边包被双层脂质膜，可见中央色淡、周边浓染，边缘清晰，具有外泌体的特征性表现。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Circulating miRNAs as biomarkers for severe acute pancreatitis associated with acute lung injury[J]. Xiao-Guang Lu,Xin Kang,Li-Bin Zhan,Li-Min Kang,Zhi-Wei Fan,Li-Zhi Bai. World Journal of Gastroenterology. 2017(41)
[2]胶质瘤细胞来源外泌体的提取与鉴定[J]. 王维冰,吴世双,付佳乐,于如同,周秀萍. 临床神经外科杂志. 2017(05)
[3]6例食用含三聚氰胺奶粉中毒死亡患儿的法医学分析[J]. 赵杰,李红涛. 法医学杂志. 2015(03)
[4]Primary analysis and screening of microRNAs in gastric cancer side population cells[J]. Hai-Hong Zhang,Guo-Li Gu,Xiang-Yang Zhang,Feng-Zhi Li,Li Ding,Qin Fan,Ran Wu,Wei Shi,Xin-Yan Wang,Lin Chen,Xue-Ming Wei,Xiao-Ying Yuan. World Journal of Gastroenterology. 2015(12)
[5]膀胱尿路上皮癌患者血液中微小RNA的表达[J]. 张治草,黄毅,王秀杰,王猛,马潞林. 北京大学学报(医学版). 2013(04)
[6]三聚氰胺污染奶粉致双肾结石婴幼儿2年后随访分析[J]. 杨黎,文建国,娄安锋,任川川,李燕,晋朝娜. 临床泌尿外科杂志. 2011(10)
[7]三聚氰胺污染奶粉相关泌尿系结石危险因素的多中心巢式病例-对照研究[J]. 管娜,姚晨,黄松明,胡宝金,张东风,方琪纬,范青锋,徐国兵,朱赛楠,张爱华,刘洪,刘玲,张格妙,陶立源,常艳美,刘晓宇,艾乙,赵一鸣,丁洁. 北京大学学报(医学版). 2010(06)
[8]三聚氰胺污染奶粉致婴幼儿泌尿系统结石病例的流行病学特征分析[J]. 李慧,杨海霞,陈瑞,蔡美,张静,张清华,曹永琴. 中国初级卫生保健. 2010(12)
[9]巨噬细胞在高草酸尿症大鼠肾内结石晶体形成过程中的作用[J]. 关晓峰,邓耀良,黎承扬,孙丙华. 中华泌尿外科杂志. 2010 (02)
[10]甘肃省食用添加三聚氰胺奶粉的婴幼儿结石发病情况调查[J]. 王伟,包军胜,杨克虎,吴恭瑾,卢建中,尚攀峰,李广杰,岳中瑾. 中国循证医学杂志. 2009(11)
本文编号：2945314
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：147 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
0～4mM草酸组的HK-2细胞生存率：从0mM组到0.5mM组，差别无统计学意义（P＞0.05）；从1mM组到10mM组，差别有统计学意义（*P＜0.05；**P＜0.01）
图 1-2 光镜下 HK-2 细胞经 0～4 mM 草酸干预后的形态学特征（×100，200）正常；B 组细胞形态大致正常，密度稍有减少；C 组细胞形态开始变异，密度减显减少，出现明显纤维化及变性坏死。Figure1-2 Morphological characteristics of HK-2 cells under different concent00,200). The cell morphology and density were normal in group A; The cell morphal and the density was slightly decreased in group B; The cell morphology begansity decreased in group C; The cell density was significantly reduced,showing obeneration and necrosis in group D.3. LDH 法检测细胞活力各组 LDH 的含量：0 mmol/L 组为（100±14.80）%；1 mmol/L 11.10）%；2 mmol/L 组为（254.67±26.11）%；4 mmol/L 组
胞-晶体反应中外泌体的 miRNAs 表达谱分析及其调控巨噬细胞极化的初步研究 2018 届博士学位论±13.32）%，组间比较差别有统计学意义（*P＜0.05，**P＜0.01）（图 1-3图 1-3 0～4 mM 草酸组的 LDH 表达情况，1～4 mM 组差别有统计学意义（*P＜0.05；**P＜0.01Figure 1-3 From 1mM group to 4mM group, the significant difference were obvious(*P＜0.05;**P.01).4. 外泌体的鉴定4.1 透射电镜下外泌体的形态结构各组均可产生这种大小均匀、形态一致的圆形或椭圆形的囊泡，部囊泡有融合现象。外泌体直径均介于 30～100nm 之间，平均约 80nm。外泌体外周边包被双层脂质膜，可见中央色淡、周边浓染，边缘清晰，具有外泌体的特征性表现。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Circulating miRNAs as biomarkers for severe acute pancreatitis associated with acute lung injury[J]. Xiao-Guang Lu,Xin Kang,Li-Bin Zhan,Li-Min Kang,Zhi-Wei Fan,Li-Zhi Bai. World Journal of Gastroenterology. 2017(41)
[2]胶质瘤细胞来源外泌体的提取与鉴定[J]. 王维冰,吴世双,付佳乐,于如同,周秀萍. 临床神经外科杂志. 2017(05)
[3]6例食用含三聚氰胺奶粉中毒死亡患儿的法医学分析[J]. 赵杰,李红涛. 法医学杂志. 2015(03)
[4]Primary analysis and screening of microRNAs in gastric cancer side population cells[J]. Hai-Hong Zhang,Guo-Li Gu,Xiang-Yang Zhang,Feng-Zhi Li,Li Ding,Qin Fan,Ran Wu,Wei Shi,Xin-Yan Wang,Lin Chen,Xue-Ming Wei,Xiao-Ying Yuan. World Journal of Gastroenterology. 2015(12)
[5]膀胱尿路上皮癌患者血液中微小RNA的表达[J]. 张治草,黄毅,王秀杰,王猛,马潞林. 北京大学学报(医学版). 2013(04)
[6]三聚氰胺污染奶粉致双肾结石婴幼儿2年后随访分析[J]. 杨黎,文建国,娄安锋,任川川,李燕,晋朝娜. 临床泌尿外科杂志. 2011(10)
[7]三聚氰胺污染奶粉相关泌尿系结石危险因素的多中心巢式病例-对照研究[J]. 管娜,姚晨,黄松明,胡宝金,张东风,方琪纬,范青锋,徐国兵,朱赛楠,张爱华,刘洪,刘玲,张格妙,陶立源,常艳美,刘晓宇,艾乙,赵一鸣,丁洁. 北京大学学报(医学版). 2010(06)
[8]三聚氰胺污染奶粉致婴幼儿泌尿系统结石病例的流行病学特征分析[J]. 李慧,杨海霞,陈瑞,蔡美,张静,张清华,曹永琴. 中国初级卫生保健. 2010(12)
[9]巨噬细胞在高草酸尿症大鼠肾内结石晶体形成过程中的作用[J]. 关晓峰,邓耀良,黎承扬,孙丙华. 中华泌尿外科杂志. 2010 (02)
[10]甘肃省食用添加三聚氰胺奶粉的婴幼儿结石发病情况调查[J]. 王伟,包军胜,杨克虎,吴恭瑾,卢建中,尚攀峰,李广杰,岳中瑾. 中国循证医学杂志. 2009(11)
本文编号：2945314
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