miR-322对生精细胞的调控机制及其对高DFI男性不育患者的诊断意义

发布时间：2021-01-02 18:10

　　目的:1.了解在下调miR-322后的GC-2细胞中,细胞增殖和凋亡的改变以及凋亡相关因子的表达变化;2.找寻miR-322影响GC-2细胞增殖和凋亡的靶基因位点并验证;3.评估在高DFI男性不育患者精浆中,miR-424（后统一称为同源miR-322）及其靶基因的表达水平共同作为病因诊断和治疗的价值。方法:1.增殖率的检测:根据向GC-2细胞中转染的miRNA的模拟物（Mimic）、抑制物（Inhibitor）及相应阴性对照物（NC,Negative Control）的不同分为7组。A组为转染 miR-29c mimic 组;B 组为转染 miR-29c inhibitor 组;C 组为转染 miRNAmimic NC组;D组为转染miR-322 mimic组;E组为转染miR-322 inhibitor组;F组为转染miRNA inhibitor NC组;G组未转染的空白对照组。用MTT法和CCK8法检测各组细胞的增殖率并比较各组结果的差异。2.凋亡率的检测:分别将向GC-2细胞中转染miR-322 inhibitor,inhibitor NC以及空白对照细胞定为H～J组,使用流式... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图５－２用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ来检测下调ｍｉＲ－３２２的ＧＣ－２细胞中Ｄｄｘ３ｘ蛋白的表达，Ａ??图是ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ后照相所得的图，Ｂ图是３次独立实验后统计分析的ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??

５．２．１构建含有Ｄｄｘ３ｘ耙基因位点３’ＵＴＲ片段的野生型和突变型报告基因质粒??根据网上数据库预测信息构建的含有Ｄｄｘ３ｘ的３’ＵＴＲ片段的野生型以及突变??型报告基因质粒，其预测的结合情况如图５－３所示。??根据上海生工公司的测序结果显示（如图５－４，５－５所示），构建的野生型（ＷＴ）??和突变型（ＭＴ）报告基因质粒和预期序列一致。分别扩增含有ＷＴ和ＭＴ的Ｄｄｘ３ｘ??３，ＵＴＲ片段以及分别双酶切含有ＷＴ和ＭＴ的两个报告基因质粒，经ＰＣＲ电泳结??果（如图５－６）显示，扩増的有ＷＴ和ＭＴ的Ｄｄｘ３ｘ’ＵＴＲ片段以及含有ＷＴ和ＭＴ??的两个报告基因的质粒，其大小和预期完全一致。这表明我们成功的构建了含有??Ｄｄｘ３ｘ－３’ＵＴＲ片段的ＭＴ和ＷＴ报告基因质粒。??Ｄｄｘ３ｘ?３＇ＵＴＲ?ＷＴ￣￣３＊?…ＵＵＣＵＡＧＡＵＡＣＵＵＵＵＵＧＣＵＧＣＵＡ…５’??ＩＩＩＭＩＩＩ??ｍｉＲ－３２２?３＇?ＡＧＧＵＵＵＵＧＵＡＣＵＵＡＡＣＧＡＣＧＡＣ?５＇??Ｉ??Ｄｄｘ３ｘ?３＇ＵＴＲ?ＭＴ?３＇…ＵＵＣＵＡＧＡＵＡａＪＵＵＵＧＡＴＧＴＴＡＡ…

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【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2953391