PKCβ/p66Shc介导氰酸盐诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤

发布时间：2021-01-31 01:51

　　目的:探讨PKCβ/p66Shc通路在氰酸盐诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）氧化应激损伤和功能障碍中的作用及机制。方法:培养HUVECs,于倒置显微镜下观察细胞的形态,选用CCK-8法检测氰酸盐对HUVECs活力的影响;DCFH-DA法检测细胞内ROS含量;比色法检测NO、MDA含量和CAT、GSH-Px、SOD酶活性;IF法观察细胞内p-p66Shc、p-PKCβ、eNOS和ICAM-1的表达;Western blot检测细胞中p66Shc、p-p66Shc、PKCβ、p-PKCβ、ICAM-1和eNOS的蛋白水平。结果:浓度为1 mM的氰酸盐对HUVECs活力具有明显的抑制作用。与对照组和甘露醇组相比,氰酸盐组细胞内ROS含量明显升高。氰酸盐诱导内皮细胞中NO含量减少,CAT、GSH-Px、SOD酶活性降低,MDA含量增加。氰酸盐引起内皮细胞内p66Shc、p-p66Shc、PKCβ、p-PKCβ和ICAM-1蛋白水平明显上调;而eNOS水平下调。PKCβ抑制剂LY333531预处理后,细胞中ROS含... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

氰酸盐对HUVECs活力的影响

图 1 氰酸盐对 HUVECs 活力的影响Fig.1 Effects of Cyanate on HUVECs viability注：n=3，*P<0.05，**P<0.01，与对照组相比较。诱导 HUVECs 形态的改变CK-8 结果提示，选取观察对照组和 1 mM 氰酸盐作用 2。结果发现，氰酸盐组较对照组细胞间隙增大、排列紊镶嵌排列结构。

重庆医科大学硕士研究生学位论文2.3 氰酸盐诱导 HUVECs 产生 ROS选用荧光探针 DCFH-DA 对细胞内产生的 ROS 进行检测，为了排除渗透压对细胞造成的影响，选用 1 mM 甘露醇作为阴性对照组，与氰酸盐作用内皮细胞相同时间（24 h）。结果显示，在对照组和甘露醇组中由 ROS 氧化 DCFH 生成的有绿色荧光的 DCF 量少，荧光微弱，无显著差异；氰酸盐组的绿色荧光较对照组和甘露醇组明显增强（P<0.05）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]PKCβ/p66Shc介导高尿素引起的人脐静脉内皮细胞ROS的产生[J]. 何菲,樊春华,郭珮,王弘凯,周宏宇,陈益,李晋芳,冉建华.  中国组织化学与细胞化学杂志. 2016(05)
[2]Antioxidants,inflammation and cardiovascular disease[J]. Harald Mangge,Kathrin Becker,Dietmar Fuchs,Johanna M Gostner.  World Journal of Cardiology. 2014(06)



本文编号：3009991