YB-1通过miR-29b-3p-VEGFA途径调控膀胱癌的血管生成
发布时间：2021-02-17 21:59
目的:膀胱癌是危害人类生命和健康的常见恶性肿瘤,目前膀胱癌的治疗主要是依据病理分期,以手术为主,辅以化学治疗,存在着高费用、高复发的缺点。为此,有关膀胱癌的研究越来越集中于靶向药物的研发,其中抗肿瘤血管生成是靶向药物研发的重要领域。通过文献调研以及生信分析,我们发现YB-1与膀胱癌患者的预后相关;YB-1可以抑制miR-29b-3p的成熟;miR-29b-3p的靶基因包括VEGFA。提出如下假说“YB-1通过抑制miR-29b-3p的成熟促进VEGFA的表达从而介导膀胱癌的血管生成”。本实验拟通过阐释YB-1与膀胱癌血管生成的内在机制,为膀胱癌的治疗提供新的靶点和研究方向。方法:Western Blot检测EJ、UMUC3、RT4、SW780 4种膀胱癌细胞系中YB-1的表达,在高表达YB-1的EJ、UMUC3细胞系中用RNA干扰技术敲减YB-1,并用EJ细胞建立对照稳转株和YB-1敲减稳转株。通过qRT-PCR、Western blot检测其下游基因VEGFA、miR-29b-3p的表达;用RNA干扰技术在YB-1敲减稳转株中敲减miR-29b-3p,qRT-PCR、Western ...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
1.1 膀胱癌概述
1.2 血管生成与膀胱癌的关系
1.3 以YB-1为靶点是研究膀胱癌血管生成的新途径
1.3.1 YB-1的功能与作用机制
1.3.2 YB-1与膀胱癌的关系
1.3.3 YB-1与VEGFA的关系
1.4 本课题的研究目的及内容
第二章 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株及实验动物
2.1.2 主要实验试剂
2.1.3 实验中主要设备
2.1.4 主要溶液配制
2.2 实验方法
2.2.1 细胞复苏
2.2.2 细胞培养及细胞传代
2.2.3 细胞冻存
2.2.4 siRNA干扰
2.2.5 shNRA干扰
2.2.6 稳转株的建立
2.2.7 CCK-8法检测YB-1对EJ细胞增值的影响
2.2.8 单克隆形成实验
2.2.9 血管生成实验
2.2.10 裸鼠成瘤在动物水平研究YB-1对膀胱癌血管生成的影响
2.2.11 人膀胱癌标本收集及检测分析
2.2.12 细胞总RNA的提取
2.2.13 反转录cDNA的合成
2.2.14 qRT-PCR检测YB-1、VEGFA、miR-29b-3p的表达
2.2.15 统计学分析
2.2.16 Western blot相关检测
第三章 实验结果
3.1 人膀胱癌细胞系中YB-1的表达情况
3.2 在EJ、UMUC3细胞系中敲减YB-1的表达
3.2.1 以shRNA转染EJ细胞并筛选EJ细胞的YB-1敲减稳转株（YB-1KD-EJ）和对照稳转株（CTRL-EJ）
3.2.2 以siRNA转染UMUC3细胞
3.3 在EJ、UMUC3细胞系中敲减YB-1后VEGFA表达降低,miR-29b-3p升高
3.3.1 在EJ细胞系中敲减YB-1后VEGFA表达降低,miR-29b-3p升高
3.3.2 在UMUC3细胞系中敲减YB-1后,VEGFA显著降低,而miR-29b-3p显著升高
3.4 在YB-1KD细胞系中敲减miR-29b-3p的表达可以逆转VEGFA的表达
3.4.1 qRT-PCR检测示在YB-1KD细胞株中敲减miR-29b-3p的表达可以逆转VEGFA的表达
3.4.2 WB检测示在YB-1KD-EJ细胞株中敲减miR-29b-3p的表达可以逆转VEGFA的表达
3.5 在EJ细胞系中敲减YB-1后细胞表型的变化
3.5.1 EJ细胞系敲减YB-1后增值能力未见明显变化
3.5.2 EJ细胞系敲减YB-1后克隆形成能力未见明显变化
3.5.3 EJ细胞系敲减YB-1后诱导血管形成的能力减弱
3.6 裸鼠皮下成瘤实验
3.6.1 EJ细胞系敲减YB-1后裸鼠肿瘤模型的生长速度减慢
3.6.2 EJ细胞系敲减YB-1后裸鼠肿瘤中的血管生成明显减少
3.7 人膀胱癌标本中YB-1与VEGFA关系
第四章 讨论
4.1 YB-1在膀胱癌细胞系中的表达情况
4.2 YB-1对miR-29b-3p表达的调控
4.3 miR-29b-3p与恶性肿瘤的关系
4.4 YB-1调控VEGFA表达的机制
4.5 YB-1对膀胱癌细胞增值的影响
4.6 YB-1对膀胱癌中血管生成的影响
4.7 YB-1作为膀胱癌治疗靶点的前景
第五章 结论
参考文献
附录
7.1 细胞的蛋白提取
7.2 BCA法测定目的蛋白浓度
7.3 WB法检测蛋白的表达
在学期间的研究成果
致谢
本文编号：3038604
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：57 页
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Abstract
缩略词表
第一章 绪论
1.1 膀胱癌概述
1.2 血管生成与膀胱癌的关系
1.3 以YB-1为靶点是研究膀胱癌血管生成的新途径
1.3.1 YB-1的功能与作用机制
1.3.2 YB-1与膀胱癌的关系
1.3.3 YB-1与VEGFA的关系
1.4 本课题的研究目的及内容
第二章 实验材料和方法
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株及实验动物
2.1.2 主要实验试剂
2.1.3 实验中主要设备
2.1.4 主要溶液配制
2.2 实验方法
2.2.1 细胞复苏
2.2.2 细胞培养及细胞传代
2.2.3 细胞冻存
2.2.4 siRNA干扰
2.2.5 shNRA干扰
2.2.6 稳转株的建立
2.2.7 CCK-8法检测YB-1对EJ细胞增值的影响
2.2.8 单克隆形成实验
2.2.9 血管生成实验
2.2.10 裸鼠成瘤在动物水平研究YB-1对膀胱癌血管生成的影响
2.2.11 人膀胱癌标本收集及检测分析
2.2.12 细胞总RNA的提取
2.2.13 反转录cDNA的合成
2.2.14 qRT-PCR检测YB-1、VEGFA、miR-29b-3p的表达
2.2.15 统计学分析
2.2.16 Western blot相关检测
第三章 实验结果
3.1 人膀胱癌细胞系中YB-1的表达情况
3.2 在EJ、UMUC3细胞系中敲减YB-1的表达
3.2.1 以shRNA转染EJ细胞并筛选EJ细胞的YB-1敲减稳转株（YB-1KD-EJ）和对照稳转株（CTRL-EJ）
3.2.2 以siRNA转染UMUC3细胞
3.3 在EJ、UMUC3细胞系中敲减YB-1后VEGFA表达降低,miR-29b-3p升高
3.3.1 在EJ细胞系中敲减YB-1后VEGFA表达降低,miR-29b-3p升高
3.3.2 在UMUC3细胞系中敲减YB-1后,VEGFA显著降低,而miR-29b-3p显著升高
3.4 在YB-1KD细胞系中敲减miR-29b-3p的表达可以逆转VEGFA的表达
3.4.1 qRT-PCR检测示在YB-1KD细胞株中敲减miR-29b-3p的表达可以逆转VEGFA的表达
3.4.2 WB检测示在YB-1KD-EJ细胞株中敲减miR-29b-3p的表达可以逆转VEGFA的表达
3.5 在EJ细胞系中敲减YB-1后细胞表型的变化
3.5.1 EJ细胞系敲减YB-1后增值能力未见明显变化
3.5.2 EJ细胞系敲减YB-1后克隆形成能力未见明显变化
3.5.3 EJ细胞系敲减YB-1后诱导血管形成的能力减弱
3.6 裸鼠皮下成瘤实验
3.6.1 EJ细胞系敲减YB-1后裸鼠肿瘤模型的生长速度减慢
3.6.2 EJ细胞系敲减YB-1后裸鼠肿瘤中的血管生成明显减少
3.7 人膀胱癌标本中YB-1与VEGFA关系
第四章 讨论
4.1 YB-1在膀胱癌细胞系中的表达情况
4.2 YB-1对miR-29b-3p表达的调控
4.3 miR-29b-3p与恶性肿瘤的关系
4.4 YB-1调控VEGFA表达的机制
4.5 YB-1对膀胱癌细胞增值的影响
4.6 YB-1对膀胱癌中血管生成的影响
4.7 YB-1作为膀胱癌治疗靶点的前景
第五章 结论
参考文献
附录
7.1 细胞的蛋白提取
7.2 BCA法测定目的蛋白浓度
7.3 WB法检测蛋白的表达
在学期间的研究成果
致谢
本文编号：3038604
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