ARNO/Arf6信号通路在AGEs致肾小球内皮高通透性的作用及机制研究
发布时间：2021-02-17 22:53
背景和目的:糖尿病早期内皮/肾小球高通透性（Endothelial/glomerular hyperpermeability）是早期糖尿病肾病（Diabetic nephropathies,DN）重要的病理生理改变,可是我们对其发生机制仍然一筹莫展。已经知道高糖、晚期糖基化终末产物（Advanced glycation end products,AGEs）、内皮源性一氧化氮（NO）产生减少、炎症及氧化应激等多种因素可促进肾小球内皮细胞的通透性,但这些因素最终是通过改变内皮细胞的屏障功能实现的,因此有必要研究内皮屏障稳定调控的关键机制,才能找到DN的治疗靶点。ADP核糖基化因子（ADP-ribosylation factors,ARFs）是真核细胞中广泛表达且高度保守的GTP结合蛋白,是Ras超家族成员之一。Arf6作为ARFs一种特殊亚型,定位于质膜和内涵体膜上。与其它小分子GTP结合蛋白一样,Arf6在有活性的GTP和无活性的GDP两种结合构象之间转换,其中Arf6-GDP到Arf6-GTP的转换需要鸟苷交换因子（guanine nucleotide exchange factors...
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
浓度依赖实验中AGEs对HRGECs细胞活力、ARNOmRNA转录及protein表达、Arf6活性和内皮细胞通透性的影响：*P<0.05，**P<0.01
陆军军医大学硕士学位论文221.2.2时间依赖实验中AGEs对HRGECs中ARNO/Arf6信号通路及通透性的影响CCK8检测结果显示，各组吸光度差异无统计学意义(图1-2A)，但AGEs48h组HRGECs吸光度均值相对偏低，光镜下观察细胞生长速度偏慢，漂浮细胞量偏多，提示AGEs刺激时间≥48h时可能对HRGECs生长状态产生影响。Real-timePCR及Westernblotting结果显示，与AGEs对照组相比，AGEs显著增加HRGECsARNOmRNA转录和protein表达(P<0.05，图1-2B、C、D)，该作用呈时间依赖性。与AGEs对照组相比，ARNO表达最高的AGEs48h组，蛋白表达量约为3.4倍。pulldownassay及FITC-Dextran(40kDa)检测结果显示，AGEs也时间依赖性增加HRGECsArf6活性和内皮细胞通透性(P<0.05，图1-2C、E、F)，该作用趋势与ARNO表达趋势一致。图1-2时间依赖实验中AGEs对HRGECs细胞活力、ARNOmRNA及protein表达、Arf6活性和内皮细胞通透性的影响：*P<0.05，**P<0.01。Control：AGEs对照组。根据以上时间和浓度依赖实验结果，80μg/mlAGEs刺激24h时，HRGECsARNO/Arf6信号活化和内皮通透性改变显著，细胞活力也影响较小，故我们选择80μg/mlAGEs刺激24h作为后续的AGEs刺激条件。1.2.360min以内高糖对HRGECs中ARNO表达及通透性的影响60min以内高糖时间依赖实验中，Westernblotting检测结果显示，与高糖对照组相比，高糖显著增加HRGECsARNO表达(P<0.05，图1-3A、B)，30min达到最高，45min后出现回落。与高糖对照组相比，ARNO表达最高的高糖30min组，蛋白表达
陆军军医大学硕士学位论文23量在4倍以上。FITC-Dextran(40kDa)检测结果显示，内皮细胞通透性与ARNO表达时间趋势一致(图1-3C)。甘露醇组与高糖对照组ARNO表达及内皮细胞通透性差异无统计学意义。选用30min为60min以内高糖浓度依赖实验时相点。Westernblotting检测结果显示，与正常糖组相比，高糖显著增加HRGECsARNO表达(P<0.05，图1-3D、E)，该作用呈浓度依赖性。与正常糖组相比，ARNO表达最高的高糖40mmol/L组，蛋白表达量近7倍。FITC-Dextran(40kDa)检测结果显示，高糖也浓度依赖性增加HRGECs通透性(图1-3F)。甘露醇组与正常糖组ARNO表达及内皮细胞通透性差异无统计学意义。图1-360min内时间/浓度依赖实验中高糖对HRGECsARNO表达及通透性的影响：*P<0.05，**P<0.01。A、B、CControl：高糖对照组。D、E、FControl：正常糖组。1.2.46h以上高糖对HRGECs中ARNO表达及通透性的影响6h以上高糖浓度依赖实验中，Westernblotting及FITC-Dextran(40kDa)检测结果显示，与正常糖组相比，高糖30mmol/L、40mmol/L组HRGECsARNO表达和内皮细胞通透性升高(P<0.05，图1-4A、B、C)，而10mmol/L、20mmol/L组差异均无统计学意义。与正常糖组相比，ARNO表达最高的高糖40mmol/L组，蛋白表达量约为1.5倍。甘露醇组与正常糖组ARNO表达及内皮细胞通透性差异无统计学意义。选择30mmol/L为6h以上高糖时间依赖实验刺激条件。Westernblotting及
【参考文献】：
硕士论文
[1]ROBO4/ARF6信号通路在高糖诱导的人肾小球内皮细胞高通透性的作用研究[D]. 唐璐瑶.第三军医大学 2017
本文编号：3038665
【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
浓度依赖实验中AGEs对HRGECs细胞活力、ARNOmRNA转录及protein表达、Arf6活性和内皮细胞通透性的影响：*P<0.05，**P<0.01
陆军军医大学硕士学位论文221.2.2时间依赖实验中AGEs对HRGECs中ARNO/Arf6信号通路及通透性的影响CCK8检测结果显示，各组吸光度差异无统计学意义(图1-2A)，但AGEs48h组HRGECs吸光度均值相对偏低，光镜下观察细胞生长速度偏慢，漂浮细胞量偏多，提示AGEs刺激时间≥48h时可能对HRGECs生长状态产生影响。Real-timePCR及Westernblotting结果显示，与AGEs对照组相比，AGEs显著增加HRGECsARNOmRNA转录和protein表达(P<0.05，图1-2B、C、D)，该作用呈时间依赖性。与AGEs对照组相比，ARNO表达最高的AGEs48h组，蛋白表达量约为3.4倍。pulldownassay及FITC-Dextran(40kDa)检测结果显示，AGEs也时间依赖性增加HRGECsArf6活性和内皮细胞通透性(P<0.05，图1-2C、E、F)，该作用趋势与ARNO表达趋势一致。图1-2时间依赖实验中AGEs对HRGECs细胞活力、ARNOmRNA及protein表达、Arf6活性和内皮细胞通透性的影响：*P<0.05，**P<0.01。Control：AGEs对照组。根据以上时间和浓度依赖实验结果，80μg/mlAGEs刺激24h时，HRGECsARNO/Arf6信号活化和内皮通透性改变显著，细胞活力也影响较小，故我们选择80μg/mlAGEs刺激24h作为后续的AGEs刺激条件。1.2.360min以内高糖对HRGECs中ARNO表达及通透性的影响60min以内高糖时间依赖实验中，Westernblotting检测结果显示，与高糖对照组相比，高糖显著增加HRGECsARNO表达(P<0.05，图1-3A、B)，30min达到最高，45min后出现回落。与高糖对照组相比，ARNO表达最高的高糖30min组，蛋白表达
陆军军医大学硕士学位论文23量在4倍以上。FITC-Dextran(40kDa)检测结果显示，内皮细胞通透性与ARNO表达时间趋势一致(图1-3C)。甘露醇组与高糖对照组ARNO表达及内皮细胞通透性差异无统计学意义。选用30min为60min以内高糖浓度依赖实验时相点。Westernblotting检测结果显示，与正常糖组相比，高糖显著增加HRGECsARNO表达(P<0.05，图1-3D、E)，该作用呈浓度依赖性。与正常糖组相比，ARNO表达最高的高糖40mmol/L组，蛋白表达量近7倍。FITC-Dextran(40kDa)检测结果显示，高糖也浓度依赖性增加HRGECs通透性(图1-3F)。甘露醇组与正常糖组ARNO表达及内皮细胞通透性差异无统计学意义。图1-360min内时间/浓度依赖实验中高糖对HRGECsARNO表达及通透性的影响：*P<0.05，**P<0.01。A、B、CControl：高糖对照组。D、E、FControl：正常糖组。1.2.46h以上高糖对HRGECs中ARNO表达及通透性的影响6h以上高糖浓度依赖实验中，Westernblotting及FITC-Dextran(40kDa)检测结果显示，与正常糖组相比，高糖30mmol/L、40mmol/L组HRGECsARNO表达和内皮细胞通透性升高(P<0.05，图1-4A、B、C)，而10mmol/L、20mmol/L组差异均无统计学意义。与正常糖组相比，ARNO表达最高的高糖40mmol/L组，蛋白表达量约为1.5倍。甘露醇组与正常糖组ARNO表达及内皮细胞通透性差异无统计学意义。选择30mmol/L为6h以上高糖时间依赖实验刺激条件。Westernblotting及
【参考文献】：
硕士论文
[1]ROBO4/ARF6信号通路在高糖诱导的人肾小球内皮细胞高通透性的作用研究[D]. 唐璐瑶.第三军医大学 2017
本文编号：3038665
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mjlw/3038665.html
最近更新
教材专著
