体外诱导人肾间质成纤维细胞成骨分化的实验研究

发布时间：2017-04-16 20:11

  本文关键词：体外诱导人肾间质成纤维细胞成骨分化的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：观察在体外培养条件下,使用成骨诱导培养液和不同浓度钙离子诱导人肾间质成纤维细胞发生成骨分化的效果,以此初步探讨肾脏Randall斑形成的可能的细胞学机制。方法：体外培养人肾间质成纤维细胞,实验分为5个组：成骨诱导液组(+成骨诱导液)、Ca Ⅰ组(+0.5mmol/LCa2+), CaⅡ组(+1.5mmol/LCa2+), CaⅢ组(+2.5mmol/LCa2+)和对照组(+PBS)。各组细胞分别培养至第1d、3d、6d、9d时,采用MTT法检测细胞增殖活性。诱导至第9d时,用细胞茜素红钙染色试剂盒和改良钙钴法磷酸酶染色试剂盒对各组细胞进行染色,于倒置显微镜下拍照,观察钙结节形成和碱性磷酸酶的表达情况。同样,收集培养至第9d时的各组样本,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。另外,于细胞培养的第0、3、6和9d,采用RT-qPCR和Western bloting检测上述各组细胞Runx2 mRNA和蛋白的表达水平。结果：MTT试验结果：CaⅡ组和CaⅢ组可明显抑制细胞的增殖活性；CaI组和成骨诱导液组则无明显抑制细胞增殖活性的作用；细胞凋亡率检测结果：细胞培养至第9d时,3个浓度钙离子诱导液组和成骨诱导组的细胞凋亡率分别是4.5%、37%、55%和2%,正常对照组为0.5%；细胞茜素红钙染色结果：成骨诱导组和高钙离子组均可见典型阳性红色钙结节表现,而对照组呈现阴性；碱性磷酸酶染色结果：高钙离子组均可以见到典型的黑色块状的硫化钴沉淀物,而正常对照组染色结果阴性；RT-qPCR结果：成骨诱导组、CaⅡ组分别培养至第3d、6d、9d时,细胞样本Runx2 mRNA表达水平均高于0d组,和0d组比较,差异均有统计学意义(p0.05)；第9d时,Ca Ⅰ组、Ca Ⅱ组、CaⅢ组其细胞Runx2 mRNA表达均高于对照组,和对照组相比,差异有统计学意义。5、Western blotting结果：与Od组比较,培养至第3d、6d、9d时的成骨诱导组和Ca Ⅱ组细胞Runx2蛋白的表达水平均升高,差异均有统计学意义(p0.05)；Ca Ⅰ组、Ca Ⅱ组、CaⅢ组细胞Runx2蛋白表达水平均高于对照组,与对照组比较,差异有统计学意义(p0.05)。结论：1、在体外培养环境下,人肾成纤维细胞在成骨诱导培养液的刺激作用下发生成骨分化。2、在高钙离子环境下,人肾成纤维细胞也发生了类似的成骨分化。3、肾乳头组织中的成纤维细胞在高钙离子等因素的作用下发生成骨分化,这可能是肾脏Randall形成的细胞学基础。
【关键词】：人肾成纤维细胞 成骨分化 肾乳头钙化斑 高钙尿症 肾结石
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 个人简历3-5
• 英文缩略语中英文对照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 实验材料12-15
• 实验方法15-28
• 实验结果28-43
• 讨论43-47
• 小结47-48
• 参考文献48-52
• 综述部分52-76
• 参考文献64-76
• 致谢76-77
• 攻读学位期间发表的论文77

【参考文献】

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1 李秀兰;张杨;师宜健;王增立;;体外诱导成纤维细胞成骨活性表达的研究[J];中国修复重建外科杂志;2006年02期

  本文关键词：体外诱导人肾间质成纤维细胞成骨分化的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：311579