西格列汀对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞JNK信号通路的影响

发布时间：2017-04-16 20:17

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【摘要】：目的:1.探究二肽基肽酶IV(DDP-IV)抑制剂西格列汀对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡是否有保护作用。2.检测MAPK信号通路蛋白JNK的浓度变化,探究二肽基肽酶IV(DDP-IV)抑制剂西格列汀发挥作用的机制。方法:体外完全培养基培养大鼠肾小管上皮细胞,待细胞生长铺满培养皿70%-80%时换用无胎牛血清培养基,生长24小时使细胞生长同步化,之后进行分组如下:⑴正常对照组:低糖(5.5mmol/L)环境下培养;⑵高糖组:高糖(25mmol/L)环境下培养;⑶西格列汀干预组:预先加入西格列汀处理1小时后转移至高糖培养基下培养;⑷JNK信号通路阻断剂组:预先加入JNK信号通路的特异性阻断剂SP600125处理1小时后将大鼠肾小管上皮细胞转移至高糖培养基下培养。之后采用流式细胞术检测实验各组细胞的凋亡程度,RT-PCR技术检测实验各组细胞的JNK基因表达的水平,Western Blot方法测定实验各组细胞内磷酸化的JNK蛋白的表达变化。结果:1.流式细胞术示:与对照组相比,高糖组细胞凋亡明显增多;与高糖组相比,西格列汀干预组和阻断剂组细胞凋亡明显减少,差异有统计学意义((P0.05)。2.RT-PCR结果示:与正常组相比,高糖组磷酸化的JNK显著增高;与高糖组相比,西格列汀组、阻断剂组磷酸化的JNK均显著减少,差异有统计学意义((P0.05)。3.Western Blot结果示:与正常组相比,高糖组磷酸化的JNK表达明显增多;与高糖组相比,西格列汀组、阻断剂组磷酸化的JNK表达明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:西格列汀可以减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞的凋亡,其机制可能是通过抑制JNK信号通路的表达来发挥作用。
【关键词】：西格列汀 JNK信号通路 肾小管上皮细胞 MAPK信号通路
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 常用英文缩写词表9-10
• 前言10-12
• 1 材料与方法12-23
• 1.1 材料、试剂与仪器设备12-16
• 1.1.1 细胞株12
• 1.1.2 主要试剂12-13
• 1.1.3 主要仪器13-14
• 1.1.4 试剂配置14-16
• 1.2 指标检测及实验方法16-22
• 1.2.1 肾小管上皮细胞的培养16-17
• 1.2.2 流式细胞术测细胞凋亡17
• 1.2.3 Real time-PCR检测c-jun的表达水平17-21
• 1.2.4 Western blot检测磷酸化JNK21-22
• 1.3 统计学方法22-23
• 2 结果23-27
• 2.1 各组肾小管细胞流式细胞术凋亡的结果23-24
• 2.2 实验各组肾小管上皮细胞pJNK的RealTime-PCR的结果24-25
• 2.3 实验各组肾小管上皮细胞Western blot检测pJNK的结果25-27
• 3 讨论27-30
• 4 结论30-31
• 参考文献31-34
• 综述34-41
• 参考文献38-41
• 在研期间参与课题及成果41-42
• 致谢42-43
• 个人简历43

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