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5-氮杂胞嘧啶核苷通过逆转hepaCAM基因启动子甲基化抑制膀胱癌细胞增殖

发布时间:2024-06-14 02:22
  第一部分hepaCAM基因腺病毒载体构建和鉴定 目的:构建表达hepaCAM基因的重组腺病毒并在膀胱癌BIU-87细胞中鉴定。 方法:以pEGFP-N2-hepaCAM质粒载体为模板,PCR扩增hepaCAM基因;将hepaCAM基因克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV,构建穿梭载体pAdtrack-CMV-hepaCAM;经PmeI线性化后,在含pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,筛选阳性克隆;线性化后在HEK-293细胞中包装、扩增,利用报告基因EGFP进行病毒滴度检测;实时荧光定量PCR,Western blot鉴定感染腺病毒的膀胱癌BIU-87细胞中hepaCAM基因的表达。 结果:测序、酶切验证重组腺病毒载体pAdEasyI-hepaCAM构建成功;病毒滴度可达1.6×1012;荧光定量PCR、 Western blot均显示感染hepaCAM腺病毒后膀胱癌BIU-87细胞中hepaCAM基因表达增高。 结论:成功构建hepaCAM腺病毒载体。 第二部分5-氮杂胞嘧啶核苷通过逆转hepaCAM基因启动子甲基化抑制膀胱癌细胞增殖 目的:探究去甲基化药物5-...

【文章页数】:64 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

图1.1hepaCAM基因PCR扩增产物凝胶电泳图

图1.1hepaCAM基因PCR扩增产物凝胶电泳图

e)化学发光在暗室条件下,将发光液A、B液按所需量1:1吸干残留液体,用移液器将混匀的发光液均匀地覆盖于PV仪器中成像。7统计分析所有数据都用SPSS16.0统计学软件分析,结果都以(x析方法对不同组间数据进行比较,结果以p<0.05表示统计具果Hep....


图1.2重组穿梭质粒的PCR验证Fig.1.2IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithPCRM:DNAmarkerDL2000;1,2,3,4,5,6:hepaCAM基因PCR扩增产物

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图1.3重组穿梭质粒的PCR验证Fig.1.3Identificationofrecombinantshuttleplasmidwithrestrictiveenzymedigestion

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图1.3重组穿梭质粒的PCR验证Fig.1.3IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithrestrictiveenzymedigestionM:DNAmarkerDL2000;1,2:kpnI和....


图1.4重组穿梭质粒测序结果

图1.4重组穿梭质粒测序结果

图1.2重组穿梭质粒的PCR验证Fig.1.2IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithPCRM:DNAmarkerDL2000;1,2,3,4,5,6:hepaCAM基因PCR扩增产物图1.....



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