Hsa-let-7a及其靶点—IGF1R在复发前列腺癌中的表达差异

发布时间：2017-04-17 00:16

  本文关键词：Hsa-let-7a及其靶点—IGF1R在复发前列腺癌中的表达差异，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：前列腺癌已成为全球男性人群中发病率最高的恶性肿瘤。其中根治性前列腺切除术为早期前列腺癌的治疗方法。约有30%的前列腺癌患者术后复发,并伴有血清前列腺特异性抗原(PSA)表达水平升高。术后复发往往是造成前列腺癌患者致死的主要因素。目前一些前列腺特异性抗原已成为复发前列腺癌肿瘤标记物,但患者往往存在个体差异,前列腺特异性抗原检查无法进行准确诊断,因此现阶段亟待发现能够早期诊断复发前列腺癌的新型肿瘤标记物。MicroRNA及肿瘤干细胞相关研究已有大量报道。研究表明microRNA是一类内生的、长度约为22个核苷酸的小RNA。它可调节细胞生命活动,并参与生命过程中一系列的重要进程,包括早期发育、细胞增殖、细胞凋亡、细胞死亡、脂肪代谢和细胞分化,因此在肿瘤的发生发展过程中起着重要作用。肿瘤干细胞是肿瘤中具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞,其具有极强的致瘤能力。我们对68例患前列腺癌后接受根治性前列腺切除术患者(32例术后复发,36例非复发)进行了研究。我们选取研究报道过的前列腺癌干细胞中表达差异的6个microRNA(microRNA-143,microRNA-145,microRNA-200a,microRNA-100,mircroRNA-17,microRNA-let-7a)。分别提取前列腺癌组织样本RNA,逆转录合成cDNA,采用荧光实时定量PCR方法检测6个microRNA的表达情况,结果发现hsa-let-7a的表达水平在术后复发组样本中显著降低。经查阅,我们发现hsa-let-7a的靶点是IGF1R基因,并通过荧光素酶活性实验进一步验证了这一结论。荧光实时定量PCR,Western blotting实验表明在术后复发组样本中,IGF1R的mRNA和蛋白表达量较非复发组显著升高,同时其下游效应分子一氧化氮合酶(iNOS)表达上调,NO和cGMP浓度升高。将携带hsa-let-7a质粒转染入前列腺LNCaP细胞后发现外源性hsa-let-7a的过表达抑制了IGF1R及iNOS的表达,NO和cGMP浓度随之降低。MTT比色法和流式细胞术结果显示过表达hsa-let-7a组细胞存活率较阴性对照组和转染hsa-let-7a抑制因子组低,hsa-let-7a在细胞中的过表达可诱导细胞凋亡进而影响前列腺癌细胞的增殖。综上,本研究发现hsa-let-7a作用于前列腺癌细胞中的IGF1R基因。Hsa-let-7a-IGF1R-iNOS-NO-cGMP信号转导通路在前列腺癌细胞增殖增生过程中起着重要作用。对hsa-let-7a进行更为深入研究可为复发前列腺癌提供新型诊断标记物及治疗靶点。
【关键词】：Hsa-let-7a IGF1R 复发前列腺癌 细胞增殖 细胞凋亡
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文缩略词索引10-11
• 第一章 引言11-14
• 第二章 材料与方法14-18
• 2.1 实验材料14-15
• 2.1.1 临床样本及细胞选取14
• 2.1.2 主要仪器和试剂14-15
• 2.2 实验方法15-18
• 2.2.1 RNA提取15
• 2.2.2 RT-qPCR测定miRNA的表达量15-16
• 2.2.3 细胞培养16
• 2.2.4 细胞转染16
• 2.2.5 Western blotting检测IGF1R的表达情况16
• 2.2.6 荧光素酶活性测定16-17
• 2.2.7 流式细胞术分析不同转染组细胞凋亡情况17
• 2.2.8 MTT法检测转染后各组细胞的增殖能力17
• 2.2.9 统计学方法17-18
• 第三章 实验结果18-26
• 3.1 病例信息18-19
• 3.2 术后复发组前列腺癌组织样本中mi RNA表达情况：19
• 3.3 前列腺癌细胞中has-let-7a靶基因的确定19-20
• 3.4 前列腺癌组织样本中IGF1R基因mRNA和蛋白的表达情况20-22
• 3.5 前列腺癌细胞中has-let-7a的功能研究22-26
• 第四章 讨论26-31
• 第五章 结论31-32
• 参考文献32-39
• 作者简介及科研成果39-40
• 致谢40

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本文编号：312007