p53/miR-155-5p/Sirt1环路在糖尿病肾脏病肾小管损伤中的作用机制研究

发布时间：2021-04-15 20:34

　　研究背景和目的糖尿病肾脏病（diabetic kidney disease,DKD）作为糖尿病最重要的并发症之一,因为人们生活水平的提高,糖尿病也逐渐成为了影响人类健康的重要疾病,而糖尿病肾脏病的发病率自然是随之不断升高,目前在许多国家和地区已经成为终末期肾病（ESRD）的首位原因,显著增加了糖尿病患者的死亡率。由于糖尿病肾脏病患者体内存在着复杂的代谢紊乱现象,使对发展到终末期的DKD进行治疗面临着极大的挑战和困难,非常容易导致患者死亡。因此,寻求更早期、更有效的预防和治疗糖尿病肾病的新切入点,阻止或延缓DKD进展是医学界至今未能解决的一项难题,探讨DKD的发病机制,寻找新的、有效的防御和治疗方法具有紧迫性,也具有着非常重要的医疗和社会价值。过去人们以为,糖尿病肾脏疾病是以肾小球病变为主的疾病,新近的研究发现:在DKD的发生发病过程当中,肾小管细胞的损伤发挥着与肾小球损伤同等甚至更早期的重要作用。有鉴于此,对肾小管损伤的研究显得非常重要而必要,使其成为了近年来对DKD相关研究的一个重要领域。microRNA（miRNA）是一种单链非编码RNA,大概由22-24个核苷酸组合而成,能够特异... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．１两组ｍｉＲ－１５５－５ｐ的表达（ｎ＝３）??－－＝

测软件ＴａｒｇｅｔＳｃａｎ分析，ｍｉＲ－１５５－５ｐ可与Ｓｉｒｔｌ－３＇ＵＴＲ靶向结合，因此将这个??位点构建载体。利用Ｘｈｏｌ、Ｎｏｔｌ两个限制性内切酶将目的基因片段克隆到载体??中，载体图谱如图２．２??ＢａｆｎＨｉ４４５ｉ??ＳＶ４０?Ｌａｔｅ??ｐｏ＜ｙ（Ａ）?ｆ??ｍ－Ｋｐｒ．ＩＳＢ??１６７４?Ｎ〇？ｌ?＾？ＳＶ４０？Ａｆｆｙ??＾３?Ａ?＼?ａ，：??似?＿丨?／?＼、＼?ｒ７??■??图２．２?ｐｓｉ－ＣＨＥＣＫ２载体工作原理图??Ｆｉｇｕｒｅ?２．２?Ｗｏｒｋｉｎｇ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?ｐｓｉ－ＣＨＥＣＫ２?ｃａｒｒｉｅｒ??合成Ｓｉｒｔｌ－３＇ＵＴＲ基因于ｐｓｉ－ＣＨＥＣＫ２载体，序列如下：??ＴＧＴＡＡＴＡＡＴＴＧＴＧＣＡＧＧＴＡＣＡＧＧＡＡＴＴＧＴＴＣＣＡＣＣＡＧＣＡＴＴＡＧＧＡＡ??ＣＴＴＴＡＧＣＡＴＧＴＣＡＡＡＡＴＧＡＡＴＧＴＴＴＡＣＴＴＧＴＧＡＡＣＴＣＧＡＴＡＧＡＧＣＡＡ

图２．１过表达后ｍｉＲ－１５５－５ｐ转染效率验证（ｎ＝３）??Ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｍｉＲ－１５５－５ｐ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ａｆｔｅｒ?ｏｖｅｒｅｘｐ转染?ｍｉＲ－１５５－５ｐ?ｍｉｍｉｃ?后?Ｓｉｒｔｌ、Ａｔｇ５、Ａｔｇ７?及?Ｃｏ况??ｉＲ－１５５－５ｐ?ｍｉｍｉｃ转染有效之后，我们再次用ｍｉＲ－１５２细胞，使ｍｉＲ－ｌ５５－５ｐ过表达，同时设置阴性对照的总ＲＮＡ观察Ｓｉｒｔｌ、Ａｔｇ５、Ａｔｇ７及Ｃｏｌ－１基因的ｍ，转染７２小时后，ｍｉＲ－１５５－５ｐｍｉｍｉｃ组Ｓｉｒｔｌ、Ａｔｇ５水平均比ＮＣ组明显降低，而Ｃｏｌ－１基因的ｍＲＮＡＳｉｒｔｌ（１．０００±０＿２５０?ＶＳ０．３７２±０＿０８３，＜０＿０５）；?Ａｔｇ５（ｌ＿０＜０．０５）；?Ａｔｇ７（ｌ＿０００±０．１０２?ＶＳ?０．４６９士０．０１１，＜０．０５）；??．１９８?ＶＳ?１．７４０士０．１６８，?＜０．０５）。（表?２－２，图?２．２）??


本文编号：3140040