AP-2α和Ets-1在前列腺癌细胞DU145和LNCaP中的表达水平及对PP2A-Aα的调控作用

发布时间：2017-04-22 22:04

  本文关键词：AP-2α和Ets-1在前列腺癌细胞DU145和LNCaP中的表达水平及对PP2A-Aα的调控作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：蛋白磷酸酶2A(PP2A)是一种丝氨酸/苏氨酸磷酸酶。它能控制细胞内许多蛋白的磷酸化,从而调控细胞的生命活动。如:蛋白质合成,细胞信号传导,细胞周期,细胞凋亡,代谢和应激反应,由蛋白激酶引发的信号通路的调节。现在对PP2A的复杂性和它的功能的了解进展迅速。最近的研究主要在于PP2A与人类疾病相关变化,尤其是癌症。PP2A是由3个亚基构成:催化亚基,结构亚基和调节亚基。亚基的交替与许多人类恶性肿瘤有关,PP2A抑制剂或直接激活PP2A药物为癌症治疗带来了曙光。目前关于PP2A-Aα基因是如何调控的研究已经有了一些进展,本实验分别构建了过表达转录因子ETS-1与AP-2α的表达载体并分别转入了LNCa P细胞,沉默了DU145细胞中的转录因子ETS-1与AP-2α。并利用Western blot技术与凝胶迁移滞后实验初步证明这些转录因子与PP2A-Aα表达水平的关系。通过实验我们得出了这些结论:(1)转录因子Ets-1、AP-2α在DU145和LNCa P细胞系中都有表达;(2)在DU145和LNCa P细胞系中,转录因子ETS-1不影响PP2A-Aα基因的表达;(3)凝胶迁移滞后实验证明,转录因子AP-2α在体外能与PP2A-Aα基因启动子序列特异性的结合;(4)对于LNCa P细胞,过表达AP-2α能使PP2A-Aα的表达量减少,对于DU145细胞,沉默AP-2α能使PP2A-Aα的表达量增多,这证明AP-2α能够负向调节PP2A-Aα基因的表达;综上所述,AP-2α在DU145和LNCa P细胞中负性调节PP2A-Aα的表达水平。
【关键词】：Ets-1 AP-2α PP2A-Aα 前列腺癌 DU145 LNCaP
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTACT5-10
• 第一章 前言10-24
• 1 AP-2 家族10-13
• 1.1 基因构成与进化史10
• 1.2 结构特点10-11
• 1.3 位置及功能11-13
• 1.4 AP-2 蛋白的研究方向13
• 2 ETS-1 转录因子13-20
• 2.1 ETS-1 介绍13-14
• 2.2 ETS-1 的基因位点组织：14-15
• 2.3 ETS-1 蛋白结构：15-17
• 2.4 通过泛素化和SUMO化调控ETS-1：17-18
• 2.5 ETS-1 的表达模式：18-19
• 2.6 造血系统肿瘤中的ETS-1：19-20
• 3 PP-2A家族20-24
• 3.1 PP2A结构癌症相关的基因突变20-22
• 3.2 PP2A的抑制蛋白与PP2A激活药物22-23
• 3.3 总结23-24
• 第二章 材料、试剂以及研究方法24-34
• 1 本实验的材料24
• 2 本实验的试剂24
• 3 实验仪器24
• 4 实验方法24-34
• 4.1 培养前列腺癌细胞DU145、前列腺癌细胞LNCaP。24-25
• 4.2 Western blot技术检测Ets-1, AP-2α 的表达水平25-28
• 4.2.1 列腺癌细胞DU145、前列腺癌细胞LNCaP总蛋白的提取25-26
• 4.2.2 蛋白质浓度的测定26
• 4.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳26-28
• 4.3 过表达AP-2α/ETS-1 的DU145和LNCaP细胞系的建立28-34
• 4.3.1 过表达载体的扩增28-29
• 4.3.2 lipfectamine2000转染DU145和LNCaP细胞29-30
• 4.3.3 特异性siRNA对AP-2α 和ETS-1 进行敲除30
• 4.3.4 凝胶迁移滞后实验（EMSA）分析DU145和LNCaP细胞核蛋白中AP-2α 转录因子与PP2A-Aα 基因启动子序列的体外相互作用30-31
• 4.3.5 DU145和LNCaP细胞核蛋白的提取31
• 4.3.6 双链DNA探针的退火31
• 4.3.7 双链DNA探针的标记及纯化31-32
• 4.3.8 核蛋白与双链DNA相互作用的标记反应32
• 4.3.9 非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳32-33
• 4.3.10 非变性聚丙烯酰胺凝胶的干胶及显影33-34
• 第三章 实验结果与讨论34-42
• 1 实验结果34-39
• 1.1 确定AP-2α 和ETS-1 在前列腺癌细胞DU145和LNCaP中的表达。34-35
• 1.2 AP-2α 在体外与PP2A-Aα 基因启动子序列的结合35-36
• 1.3 在DU145细胞沉默AP-2α 导致PP2A-Aα 上调36-37
• 1.4 在LNCaP细胞中过表达AP-2α 导致PP2A-Aα 的表达明显下降37-38
• 1.5 在DU145细胞中，沉默ETS-1 不改变PP2A-Aα 的表达水平38-39
• 1.6 在LNCaP细胞中，，过表达ETS-1 不改变PP2A-Aα 的表达水平39
• 2 实验讨论39-42
• 参考文献42-52
• 附录52-53
• 致谢53-55

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄马羊;宋涛;黎晓;;3'-大豆苷元磺酸钠对前列腺癌细胞的影响[J];赣南医学院学报;2010年03期

2 欧阳斌;张元原;;科学家鉴定出前列腺癌细胞的来源[J];中华男科学杂志;2010年10期

3 卫华;;前列腺癌细胞收集的改进[J];中国医疗器械信息;2011年12期

4 麦凤鸣,梁若斯,胡建波;前列腺癌细胞凋亡相关基因表达及其意义[J];广州医学院学报;2002年02期

5 张星海,杨贤强;茶多酚及儿茶素对前列腺癌细胞生长的抑制作用[J];茶叶;2003年03期

6 王共先,刘伟鹏,汪泱,傅斌,黄学明,陈庆科,袁铿,胡银英;前列腺癌细胞的原代和传代培养的研究[J];江西医学检验;2004年01期

7 龙智,蒋先镇;外源性一氧化氮对前列腺癌细胞作用的研究[J];中国男科学杂志;2005年02期

8 田媛,秦玺,胡宝成,黄翠芬;抗前列腺癌细胞特异抗体库的构建及特异结合抗体的筛选[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2005年01期

9 张岩,刘贤锡,张冰,胡海燕,龚磊;鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对前列腺癌细胞生长的抑制作用[J];中国生物化学与分子生物学报;2005年01期

10 李璐;;药用菌灵芝可切断前列腺癌细胞的血液供应[J];国外医学.药学分册;2006年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陆斌;赵善超;邓鹏;姜勇;;晚期糖基化终末产物受体存在异常定位并能促进前列腺癌细胞的增殖[A];中国病理生理学会受体、肿瘤和免疫专业委员会联合学术会议论文汇编[C];2010年

2 赵善超;贾立永;郑少斌;毛向明;杜跃军;;晚期糖基化终产物受体在前列腺癌细胞中的表达[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

3 杜俊华;姜昊文;关明;丁强;;基因芯片筛查前列腺癌细胞系抗甲基化干预后的目标基因[A];第十六届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2009年

4 吕家驹;高德轩;夏庆华;张辉;;丙戊酸对前列腺癌细胞裸鼠移植瘤生长抑制的实验研究[A];2007年华东六省一市泌尿外科学术会议暨山东省泌尿外科年会论文汇编[C];2007年

5 黄海;杜涛;黄健;许可慰;尹心宝;林天歆;江春;韩金利;郭正辉;;高效抑制核因子κ-B的茎环RNA基因序列的获得[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

6 邓勇;张炜飞;张成斌;林金明;;液相色谱串联质谱法定量检测前列腺癌细胞肌氨酸代谢[A];中国化学会第29届学术年会摘要集——第38分会：质谱分析[C];2014年

7 解杰;陈安民;郭风劲;王建超;廖晖;柳昊;;前列腺癌细胞体外骨转移立体模型的构建[A];中华医学会疼痛学分会第八届年会暨CASP成立二十周年论文集[C];2009年

8 赵福军;夏术阶;;脂质体介导靶向pPSMApromoter/enhancer-UPRT/5-FU自杀基因系统对前列腺癌细胞的作用研究[A];2007年华东六省一市泌尿外科学术会议暨山东省泌尿外科年会论文汇编[C];2007年

9 沈默;陶志华;周平;王彩虹;陈俐丽;;免疫磁珠法检测外周血微转移前列腺癌细胞的方法学探讨[A];2007年浙江省医学检验学学术年会论文汇编[C];2007年

10 宫丽华;方伟岗;;人前列腺癌细胞表达的P2Y嘌呤受体亚型特性及功能研究[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 田香;辣椒素能杀前列腺癌细胞[N];卫生与生活报;2007年

2 ;新方法可搜出隐藏的前列腺癌细胞[N];新华每日电讯;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 田聆;前列腺癌细胞中的PTEN的多重miRNA调控研究[D];复旦大学;2012年

2 刘永青;自噬在天然小分子化合物促进前列腺癌细胞死亡中的作用及其机制研究[D];山东大学;2015年

3 温冬华;前列腺癌细胞SUMO化蛋白的发现和功能研究[D];上海交通大学;2014年

4 陈勇;转录因子RUNX3对前列腺癌细胞恶性表型的影响[D];第四军医大学;2015年

5 温明新;UBE2T促进前列腺癌细胞上皮间质转化及侵袭转移的作用机制研究[D];山东大学;2015年

6 杨俊;糖原合酶激酶3β调控前列腺癌细胞死亡的机制研究[D];华中科技大学;2010年

7 庞博;前列腺癌细胞系分泌蛋白质组比较及相关蛋白功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年

8 郭琼;miR-375及MTDH在前列腺癌细胞中的功能研究[D];中南大学;2013年

9 蒋汉明;以蛋白酶体为靶点的地钱素M诱导前列腺癌细胞死亡的机制研究[D];山东大学;2013年

10 田原僮;小檗碱通过靶向AKR1C3抑制去势抵抗性前列腺癌细胞生长的作用及机制研究[D];吉林大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 刘莹;~(131)Ⅰ标记新型靶向FGF8分子探针的制备及其对前列腺癌细胞体外作用影响的实验研究[D];宁夏医科大学;2015年

2 翟红运;胚胎干细胞分泌因子对前列腺癌细胞作用的研究[D];山东大学;2015年

3 梅_g;miR-27a对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响[D];哈尔滨工业大学;2015年

4 雷咏;二甲双胍抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭并增加对紫杉醇敏感性的研究[D];广西医科大学;2015年

5 张焘;MiR-101调控前列腺癌细胞CRMP4的表达及其机制的初步研究[D];南昌大学医学院;2015年

6 唐乃玲;冷冻消融对前列腺癌细胞转化生长因子-β及smad通路影响的实验研究[D];天津医科大学;2015年

7 李婷婷;SP-1/3在前列腺癌细胞DU145和LNCaP中的表达水平及对PP2A-Aα的调控作用[D];湖南师范大学;2015年

8 易明;AP-2α和Ets-1在前列腺癌细胞DU145和LNCaP中的表达水平及对PP2A-Aα的调控作用[D];湖南师范大学;2015年

9 梁鑫;不同浓度茶多酚对两种前列腺癌细胞系生长的影响及作用机制的研究[D];青岛大学;2013年

10 余泉峰;小鼠前列腺癌细胞对骨髓间充质干细胞诱导分化作用的初步研究[D];天津医科大学;2014年

  本文关键词：AP-2α和Ets-1在前列腺癌细胞DU145和LNCaP中的表达水平及对PP2A-Aα的调控作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：321339