硫酸吲哚酚诱导脐静脉内皮细胞损伤及α-硫辛酸的干预作用

发布时间：2017-04-23 00:10

  本文关键词：硫酸吲哚酚诱导脐静脉内皮细胞损伤及α-硫辛酸的干预作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:内皮细胞功能障碍和氧化应激是心血管疾病发生发展的主要机制,慢性肾脏病(Chronic renal disease CKD)患者体内尿毒症毒素堆积是并发心血管疾病的高风险因素;其中蛋白结合型尿毒症毒素硫酸吲哚酚(Indoxyl Sulfate IS)能产生促氧化的作用,诱导血管内皮功能障碍,促进心血管疾病的发生发展,近年来抗氧化剂改善内皮细胞功能障碍的研究备受关注。目的:以人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells HUVEC)为实验模型,探讨抗氧化剂硫辛酸(alpha-lipoic acid LA)是能否干预尿毒症毒素硫酸吲哚酚(IS)诱导的氧化应激和血管内皮细胞损伤并初步探讨其作用机制。方法:对人脐静脉内皮传代细胞进行体外培养,将其分成正常对照组、硫酸吲哚酚(IS)组、硫辛酸(LA)组及硫酸吲哚酚和硫辛酸联合组(简称LA+IS组);通过ELISA法测定细胞内3-硝基酪氨酸(3-Nitro-L-tyrosine3-NT)的含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase SOD)活性,比色法测还原性谷胱甘肽(Glutathione GSH)的含量,硝酸还原酶法测量细胞培养液中一氧化氮(Nitric oxide NO)的含量及比色法测一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase NOS)活性,通过RT-PCR及荧光定量PCR技术分析内皮型一氧化氮合成酶(Endothelial nitric oxide synthase e NOS)的表达。统计学处理采用SPSS17.0软件,结果用均数±标准差表示。多组间均数比较采用单因素方差分析(ANOVA),均数两两比较采用Bonferroni法检验,P0.05具有统计学意义。各组实验至少重复4次。结果:1血管内皮细胞氧化应激指标①测定培养液GSH含量,与正常对照组(78.426±2.543mg/l)相比,IS组(54.683±3.408mg/l)GSH水平明显降低(P0.001),LA组(89.754±2.938 mg/l)较之升高(P0.001),使用LA干预后的IS+LA组(81.348±3.254mg/l)较IS组(54.683±3.408mg/l)GSH升高(P0.001)。②相比对照组SOD活性(18.186±2.106U/mgprot),IS组(12.984±1.413U/mgprot)明显降低(P0.001),使用LA干预后(20.390±1.124 U/mgprot)活性升高(P0.001),而使用IS+LA同时干预后(16.806±1.237U/mgprot)较IS组(12.984±1.413U/mgprot)SOD升高(P0.001)。2内皮细胞NO相关指标①与对照组NO(48.235±2.508umol/l)相比,IS组(35.618±3.843umol/l)显著性降低(P0.001);LA组(52.329±2.935umol/l)和IS+LA组(42.565±3.273umol/l)较IS组(35.618±3.843umol/l)NO升高(P0.001)。②NOS活性IS组(0.835±0.057U/L)较对照组(0.967±0.032U/L)相比,显著性降低(P0.001),LA组(1.054±0.083 U/L)较之明显升高(P0.001),IS+LA组(0.902±0.064U/L)较IS组(0.835±0.057U/L)NOS活性升高(P0.05)。③用ELISA法测定匀浆中3-NT含量,与对照组(38.175±5.403nmol/l)相比,IS组(47.665±4.934nmol/l)产生3-NT含量明显增加(P0.001),LA组(30.473±3.496nmol/l)较之水平下降(P0.001),而IS+LA组(35.661±4.726nmol/l)较IS组(47.665±4.934nmol/l)产生3-NT的水平明显下降(P0.001)。④RT-PCR检测结果提示:e NOS表达与对照组(1.091±0.064)相比,IS组(1.054±0.092)呈现表达下调(P0.05),而用LA处理后,LA组(1.287±0.113)明显上调(P0.05),IS+LA组(1.096±0.073)e NOS的表达水平也比较高(P0.05)。结论:1硫酸吲哚酚可诱导内皮细胞氧化应激2α-硫辛酸可能通过纠正e NOS脱偶联,清除多种ROS,改善硫酸吲哚酚对内皮细胞的氧化损伤
【关键词】：硫辛酸 硫酸吲哚酚 氧化应激 一氧化氮 eNOS脱偶
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692;R54
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-21
• 结果21-23
• 附图23-28
• 附表28-30
• 讨论30-35
• 结论35-36
• 参考文献36-39
• 综述 Α-硫辛酸在慢性肾脏疾病中的应用39-51
• 参考文献46-51
• 致谢51-52
• 个人简历52

【参考文献】

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1 Yu-Feng Tian;Chih-Tsueng He;Yu-Ting Chen;Po-Shiuan Hsieh;;Lipoic acid suppresses portal endotoxemia-induced steatohepatitis and pancreatic inflammation in rats[J];World Journal of Gastroenterology;2013年18期

  本文关键词：硫酸吲哚酚诱导脐静脉内皮细胞损伤及α-硫辛酸的干预作用，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：321532